目錄:上海帛科生物技術有限公司>>PCR試劑盒>>PCR檢測試劑盒>> 50次鮑球狀病毒PCR檢測試劑盒規(guī)格
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
鮑球狀病毒PCR檢測試劑盒規(guī)格 | Abalone Spherical VirusPCR | BK-P8743 |
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環(huán)擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
ABCF2 英文名稱: ATP結合盒轉運蛋白2抗體 0.2ml
ABLIM3 英文名稱: 肌動蛋白結合蛋白LIM蛋白3抗體 0.2ml
Acidic Calponin 英文名稱: 酸性鈣調蛋白3抗體 0.2ml
phospho-ADAM17 (Thr735) 英文名稱: 磷酸化CD156b抗體 0.2ml
ADH5 英文名稱: 乙醇脫氫酶5抗體 0.2ml
ADH6 英文名稱: 乙醇脫氫酶6抗體 0.2ml
AGPAT5 英文名稱: 溶血磷脂?;D移酶5抗體 0.2ml
AIPL1 英文名稱: 遺傳性失明相關蛋白AIPL1抗體 0.1ml
AIRE 英文名稱: 免疫調節(jié)蛋白AIRE抗體 0.2ml
phospho-AKT1 (Ser473) 英文名稱: 磷酸化蛋白激酶AKT1抗體 0.1ml
phospho-AKT1 (Thr72) 英文名稱: 磷酸化蛋白激酶AKT1抗體 0.1ml
phospho-AKT1 (Tyr326) 英文名稱: 磷酸化蛋白激酶AKT1抗體 0.1ml
ALDH1A2 英文名稱: 乙醛脫氫酶2型抗體 0.1ml
ALDH9A1 英文名稱: γ-氨基丁酸醛脫氫酶抗體 0.2ml
AGPS 英文名稱: 衰老相關蛋白5抗體 0.2ml
phospho-alpha B Crystallin (Ser59) 英文名稱: 磷酸化熱休克蛋白β5/αb晶體蛋白質/α-晶體蛋白b鏈抗體 0.1ml
AMBN 英文名稱: 釉基質蛋白抗體 0.2ml
phospho-AMPK alpha 2 (Ser176) 英文名稱: 磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α2抗體 0.1ml
phospho-AMPK alpha 2 (Ser491) 英文名稱: 磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α2抗體 0.1ml
phospho-Androgen Receptor (Ser515) 英文名稱: 磷酸化雄激素受體抗體 0.1ml
phospho-Androgen Receptor (Ser791) 英文名稱: 磷酸化雄激素受體抗體 0.1ml
Hacat(人永生化角質形成細胞) 5×106cells/瓶×2
HBL-100(人整合SV40基因的乳腺上皮細胞) 5×106cells/瓶×2
HBZY-1(大鼠腎小球系膜細胞) 5×106cells/瓶×2
HCC1937(人乳腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2
HCC827(人非小細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2
HCCC-9810(人肝內膽管癌細胞) 5×106cells/瓶×2
HCT 116(人結腸癌細胞) 5×106cells/瓶×2
HCT-15(人結腸癌細胞) 5×106cells/瓶×2
HCT-8(人盲腸腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2
HEC-1-A(人內膜腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2
HEC-1-B(人內膜腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2
Hela(人細胞) 5×106cells/瓶×2
Hep 3B(人肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2
Hep G2(人肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2
HEp-2(人喉表皮樣癌細胞) 5×106cells/瓶×2
Hepa 1-6(小鼠肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2
鮑球狀病毒PCR檢測試劑盒規(guī)格HFL1(人肺成纖維細胞) 5×106cells/瓶×2
HGC-27(人胃癌細胞) 5×106cells/瓶×2
HIC(人小腸癌細胞) 5×106cells/瓶×2
HK-2(人腎小管上皮細胞) 5×106cells/瓶×2
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現,DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發(fā)現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。