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原理是由一對引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
化膿放線菌PCR檢測試劑盒廠家 | Actinomyces pyogenesPCR | BK-P8761 |
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實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
技術(shù)原理:
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個(gè)循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時(shí)也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。
紅 標(biāo)準(zhǔn)品無效期 CAS * 規(guī)格: 200mg
棕櫚酸甲酯;Methyl hexadec CAS 112-39-0 * 規(guī)格: 25mg
紫菀;shione CAS 10376-48-4 * 規(guī)格: 20mg
乙氧基血根堿;Ethoxysanguin CAS 28342-31-6 * 規(guī)格: 20mg
石蒜堿;Lycorine hydro CAS 2188-68-3 * 規(guī)格: 20mg
異綠原酸C;Isochlorogenic CAS 32451-88-0 * 規(guī)格: 20mg
葉酸;Folic acid CAS 59-30-3 * 規(guī)格: 20mg
貝母堿苷;Sipeimine-3β-D CAS * 規(guī)格: 10mg
五味子酚;Schisanhel CAS 69363-14-0 * 規(guī)格: 20mg
11-羰基-Β-乙酰乳香酸;Acetyl CAS 67416-61-9 * 規(guī)格: 20mg
四氫非洲防己堿;Tetrahydroco CAS 483-34-1 * 規(guī)格: 20mg
甘草堿;Tabersonine CAS 4429-63-4 * 規(guī)格: 20mg
飛薊賓;Silibinin CAS 22888-70-6 * 規(guī)格: 20mg
人參皂苷F2;Ginseside F CAS 62025-49-4 * 規(guī)格: 20mg
去亞小檗堿;Demethyleneb CAS 25459-91-0 * 規(guī)格: 20mg
化膿放線菌PCR檢測試劑盒廠家彈性蛋白酶(含10mL酶解緩沖液)AM(人腺樣囊性細(xì)胞(高轉(zhuǎn)移))
泡盛曲霉 Aspergillus awamori釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
百脈根根瘤菌 Rhizobium loti黃綠綠僵菌 Metarhizium flavoviride
One StepWestern Kit AP(Mouse)/一步法快速WB(AP)試劑盒(鼠)人肺腺細(xì)胞(胸膜滲出液)
植物桿菌 Lactobacillus plantarumHGC-27人胃細(xì)胞
光帽鱗傘 Pholiota nameko鼠李糖桿菌 Lactobacillus rhamnosus
人牙周膜成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基蘇云金芽孢桿菌 Bacillus thuringiensis
人臍靜脈平滑肌細(xì)胞RTE(大鼠氣管上皮細(xì)胞)
異常漢遜酵母 Hansenula anomala嬰兒雙歧桿菌 Bifidobacterium infantis
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum小單孢菌 Micromonospora sp.
CoC1/DDP(人卵巢耐藥細(xì)胞亞株)骨瘤
皺褶假絲酵母 Candida rugosa人臍動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞
金色鏈霉菌 Streptomyces aureus凝結(jié)芽孢桿菌 Bacillus coagulans
EB-3(人Burkitt淋巴瘤細(xì)胞)豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna
泡盛曲霉 Aspergillus awamoriHB611(人肝細(xì)胞)
金色產(chǎn)色鏈霉菌 Streptomyces aureochromogenes植物桿菌 Lactobacillus plantarum
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