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技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據(jù)堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
禽偏肺病毒PCR檢測試劑盒廠家 | Avian Metapneumovirus(aMPV)RTPCR | BK-P8817 |
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
膠韌革菌 Gloeostereum incarnatumC2C12, 小鼠肌原細胞
大鼠卵巢上細胞*培養(yǎng)基100mL
USP6氨基端樣蛋白(USP6NL)重組蛋白英文名稱:Recombinant USP6 N-Terminal Like Protein (USP6NL)
胱天蛋白酶8(CASP8)重組蛋白英文名稱:Recombinant Caspase 8 (CASP8)
人肝實質(zhì)細胞*培養(yǎng)基暫無 Eupenicillium euglaucum
人成巨核細胞白血病細胞英文名稱:Daudi
SP Rabbit & Mouse HRP Kit(DAB)/兔&鼠通用型Streptavidin-HRP試劑盒(帶DAB顯色)3ml、18ml國產(chǎn)
不產(chǎn)色鏈霉菌 Streptomyces achromogenes曲霉 Aspergillus niger
肺腺英文名稱:GLC-82
SCaBER(人膀胱鱗細胞)5×106cells/瓶×2
酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp. lactisA549/DDP, 人肺腺耐藥細胞株
禽偏肺病毒PCR檢測試劑盒廠家1-丙酮氯吡 171.62 1- acetone base pyridine*:42508-60-1分子量: C8H10ClNO
3-甲-4-氯聯(lián) 3- methyl -4- chloride*:分子量:
六鈷酸鉀 332.33 Six cyanocobalamin potassium*:13963-58-1分子量: C6CoK3N6
1.3-氯丙-2 1.3 - - - - - - - - - 2 分子量:*:
4-(3-)- 186.25 4- (3- - phenyl) - piperidine*:370864-72-5分子量: C12H14N2
2--5-氯-3-硝吡 173.56 2- amino -5- -3-*:5409-39-2分子量: C5H4ClN3O2
羅漢果皂苷IV Mogroside IV 1125.29分子量:C54H92O24*:89590-95-4
2,6-二氯喹喔啉 199.04 2,6- two dichloro quinoxaline*:18671-97-1分子量: C8H4Cl2N2
洛硝噠唑 200.15 The nitrate*:7681-76-7分子量: C6H8N4O4
2-溴-4-硝甲 216.03 2- -4- nitro toluene*:7745-93-9分子量: C7H6BrNO2
間三氟甲氧 288.01 Iodine three fluorine methyl group*:198206-33-6分子量: C7H4F3IO