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注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

原理是由一對(duì)引物介導(dǎo)，能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
?
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

人胃腸道間質(zhì)瘤細(xì)胞英文名稱(chēng)：GIST

白介素1α(IL1α)重組蛋白英文名稱(chēng)：Recombinant Interleukin 1 Alpha (IL1a)

I型膠原酶(含10mL酶解緩沖)Multi-tagged Protein Lysate(293T)/多標(biāo)簽蛋白裂解(293T)

小鼠腺腫瘤細(xì)胞英文名稱(chēng)：C127

無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員2(WNT2)重組蛋白英文名稱(chēng)：Recombinant Wingless Type MMTV Integration Site Family, Member 2 (WNT2)

木霉化鏈霉菌 Streptomyces nigrificans

293A (人胚腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基 規(guī)格： 250g 用途： 用于普通的或營(yíng)養(yǎng)要求較高的細(xì)菌的培養(yǎng)，還用于醫(yī)藥工業(yè)潔凈室無(wú)菌程度的監(jiān)測(cè)及消毒劑消毒效果的...

藤黃節(jié)桿菌 Arthrobacter luteus

A3(人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

雜色曲霉 Aspergillus versicolorNi-Agarose Resin for 6x His-Tagged ProteinsNi瓊脂糖凝膠

腸桿菌屬通用PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格2-氯-7-甲喹啉  177.5  2- -7- methyl group*：875100分子量： C10H8ClN

硫鈷  123.06  Cobalt sulfide*：12013-10-4分子量： CoS2

間甲酚  M-cresol  108.14分子量： C7H8O*：108-39-4

6-氯-2,4-甲氧嘧  174.58  6- -2,4-, a*：6320-15-6分子量： C6H7ClN2O2

對(duì)氯三氯甲  229.92  Chlorine three Cl*：5216-25-1分子量： C7H4Cl4

2--5-溴三氟甲  240.02  2- amino -5- bromine three fluorine toluene*：445-02-3分子量： C7H5BrF3N

三乙二二甲  Triethylene glycol ether two  178.23分子量： C8H18O4*：112-49-2

3-羥吡  95.1  3- hydroxy pyridine*：109-00-2分子量： C5H5NO

2-甲-6-吡  169.23  2- methyl -6- phenyl pyridine*：46181-30-0分子量： C12H11N

2,4-二氟硝  159.09  2,4- two*：446-35-5分子量： C6H3F2NO2

2-二砜  233  2- two phenyl group*：4273-98-7分子量： C12H11NO2S

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。