目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>PCR試劑盒>>PCR檢測試劑盒>> 50次腸出血性大腸桿菌:血清型PCR檢測試劑盒規(guī)格
原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
腸出血性大腸桿菌:血清型PCR檢測試劑盒規(guī)格 | Enterohemorrhagic E. coli(EHEC)O104:H4PCR | BK-P9123 |
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實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
技術(shù)原理:
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實驗中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。
D-松醇;D-Pinitol CAS 10284-63-6 * 規(guī)格: 20mg
(S型)人參皂苷Rh2 ;20(S)-G CAS 67400-17-3 * 規(guī)格: 20mg
7-羥基千金子二萜醇;7β-Hydrox CAS 34208-98-5 * 規(guī)格: 20mg
千金子二萜醇二乙酰苯甲酰酯;5,15-D CAS 218916-52-0 * 規(guī)格: 20mg
蘋果酸;Malic acid CAS 6915-15-7 * 規(guī)格: 20mg
馬兜鈴酸B;Aristolochic a CAS 475-80-9 * 規(guī)格: 20mg
迷迭香酸;Rosmarinic acid CAS 20283-92-5 * 規(guī)格: 20mg
麗江堿;Foresaconitine CAS * 規(guī)格: 10mg
雷帕;Sirolimus CAS 53123-88-9 * 規(guī)格: 20mg
堅牢藍(lán)BB鹽;Fast Blue BB CAS 5486-84-0 * 規(guī)格: 100mg
金絲桃素;Hypericin CAS 548-04-9 * 規(guī)格: 10mg
黃連堿;Coptisine chlori CAS 3486-66-6 * 規(guī)格: 20mg
胡蘿卜苷;Eleutheroside A CAS 474-58-8 * 規(guī)格: 20mg
格列苯脲;Glibenclamide CAS 10238-21-8 * 規(guī)格: 20mg
二氫歐山芹醇醋酸酯;ColuMbiane CAS 23180-65-6 * 規(guī)格: 20mg
腸出血性大腸桿菌:血清型PCR檢測試劑盒規(guī)格2-巰-4-(三氟甲)嘧 180.15 2- (three) -4-*:136547-17-6分子量: C5H3F3N2S
4-羥-5-嘧 121 4- hydroxy -5- cyano pyrimidine*:4774-34-9分子量: C5H3N3O
2,5-二氟吡 115.08 2,5- two*:84476-99-3分子量: C5H3F2N
(R)-1-Boc-3- 200.28 (R) -1-Boc-3- aminopiperidine*:188111-79-7分子量: C10H20N2O2
4-氯-2-甲硫-5-甲酸乙酯嘧 232.69 4- -2- -5- ethyl benzoate*:5909-24-0分子量: C8H9ClN2O2S
2-溴-3-甲氧吡 188.02 2- bromide -3- a*:24100-18-3分子量: C6H6BrNO
1,2-二甲咪唑 96.13 1,2- two*:1739-84-0分子量: C5H8N2
鉻姆沙伯 Cr Mushabo 分子量:*:sfrcv
庚烷磺鈉 Sodium heptanesulfonate 202.24分子量: C7H15O3SNa*:22767-50-6
氫溴高烏甲 Lappaconitine hydrobromide 683.64分子量:C32H44N2O8R*:97792-45-5
2-庚并咪唑 216.32 2- heptyl benzimidazole*:5851-49-0分子量: C14H20N2
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