目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>PCR試劑盒>>PCR檢測試劑盒>> 50次絮狀表皮癬菌PCR檢測試劑盒說明書
原理是由一對引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
絮狀表皮癬菌PCR檢測試劑盒說明書 | Epidermophyton floccosumPCR | BK-P9132 |
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實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
技術(shù)原理:
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個(gè)循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時(shí)也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。
升醇-3-O-α-L-拉伯糖苷 CAS 161207-05-2 * 規(guī)格: HPLC≥98%;10mg
刺甘草查爾 CAS 34221-41-5 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
石斛堿 CAS 2115-91-5 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
異烏藥內(nèi)酯 CAS 728-61-0 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
地膚子皂苷Ic CAS 96990-18-0 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
蔓荊子黃素 CAS 479-91-4 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
蝙蝠葛堿 CAS 524-17-4 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
醇二葡萄糖苷 CAS 63902-38-5 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
土木香內(nèi)酯 CAS 546-43-0 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
去氧膽酸 CAS 83-44-3 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
薯蕷皂苷元 CAS 512-04-9 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
紅景天苷 CAS 10338-51-9 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
1,3-二啡酰奎寧酸 CAS 1182-34-9 * 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
腺嘌呤 CAS 73-24-5 * 規(guī)格: 20mg
甘氨酸 CAS 56-40-6 * 規(guī)格: 20mg
絮狀表皮癬菌PCR檢測試劑盒說明書2--3-溴-5-甲吡 187.04 2- amino -3- -5-*:17282-00-7分子量: C6H7BrN2
硬脂酸鐵 906.27 Stearic acid iron*:555-36-2分子量: C54H105FeO6
蘇丹紅7B Tonyred 7B 379.46分子量: C24H21N5*:6368-72-5
2,3,4,5-四氟硝 195.07 2,3,4,5- PTFE nitrobenzene*:5580-79-0分子量: C6HF4NO2
對溴甲酰 215.05 P-bromophenacyl hydrazine*:5933-32-4分子量: C7H7BrN2O
過錸酸鉀 289.3 Potassium perrhenate*:10466-65-6分子量: KO4Re
2--4,6-二氯-5-甲嘧 178.02 2- two -5-*:7153-13-1分子量: C5H5Cl2N3
對氟硝 141.1 To f*:350-46-9分子量: C6H4FNO2
麝香草酚 Musk grass phenol 150.22分子量: C10H14O*:89-83-8
蘇木精 Su Mujing 302.28分子量: C16H14O6*:517-28-2
美托拉宗 Metolazone 365.83分子量: C16H16ClN3O3S*:17560-51-9
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)