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原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
馬輪狀病毒PCR檢測試劑盒廠家 | Equine RotavirusRTPCR | BK-P9145 |
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實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
技術(shù)原理:
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實驗中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。
甾醇 CAS 57-87-4 * 規(guī)格: 20mg
* CAS 58970-76-6 * 規(guī)格: 20mg
萊菔子對照藥材 CAS * 規(guī)格: 1g
款冬 CAS 110042-38-1 * 規(guī)格: 20mg
紅大戟 CAS * 規(guī)格: 3g
延胡索乙素 CAS 6024-85-7 * 規(guī)格: 20mg
刺芒柄花素 CAS 485-72-3 * 規(guī)格: 20mg
* CAS 78110-38-0 * 規(guī)格: 100mg
紫堇靈 CAS * 規(guī)格: 20mg
苦玄參苷IA CAS * 規(guī)格: 20mg
壬二酸 CAS * 規(guī)格: 100mg
右旋糖酐分子量D7 CAS * 規(guī)格: 0.2g/支
癸* CAS * 規(guī)格: 100mg
貝母堿苷(暫行) CAS * 規(guī)格: 20mg
紫萁 CAS * 規(guī)格: 20mg
馬輪狀病毒PCR檢測試劑盒廠家氟替卡松 Fluticasone 500.57分子量: C25H31F3O5S*:90566-53-3
(R,R)-2,2'-異亞丙雙(4--2-惡唑啉) 334.42 (R, R) -2,2'- isopropylidenebis (4- phenyl -2- oxazolinyl)*:150529-93-4分子量: C21H22N2O2
酞菁藍(lán)B Phthalocyanine blue B 576.08分子量: C32H16CuN8*:147-14-8
堿性品紅 Fuchsin 337.85分子量: C20H20ClN3*:632-99-5
丹參酚A Salvia miltiorrhiza phenolic acid A 494.447分子量:C26H22O10*:96574-01-5
羥吳茱萸堿 Hydroxyevodiamine 319.35718分子量:C19H17N3O2*:1238-43-3
3,4,7,8-四甲-1,10-菲羅啉 236.32 3,4,7,8- four methyl -1,10-*:1660-93-1分子量: C16H16N2
鉬酸鉀 238.13 Potassium molybdate*:13446-49-6分子量: K2MoO4
2,5-二三氟甲 176.14 2,5- two amino three fluorine toluene*:364-13-6分子量: C7H7F3N2
5-溴-2,3-二羥吡 190 5- two hydroxy pyridine -2,3-*:34206-49-0分子量: C5H4BrNO2
6-溴-4,4'-二甲-2,2'-雙吡 263.14 6- two -2,2'-*:850413-36-4分子量: C12H11BrN2
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