目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>PCR試劑盒>>PCR檢測試劑盒>> 50次流感嗜血桿菌型PCR檢測試劑盒說明書
技術(shù)原理:
DNA的半保留復(fù)制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實驗中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。
注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
流感嗜血桿菌型PCR檢測試劑盒說明書 | Haemophilus influenzae BBPCR | BK-P9228 |
原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
?
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
金合歡素;刺槐素 CAS * 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/支;
8-O-乙酰山梔苷甲酯 CAS 57420-46-9 * 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/支
小檗堿;黃連素 CAS 633-65-8 * 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/支
人參皂苷Rh1 CAS 63223-86-9 * 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/支
綠原酸 CAS 327-97-9 * 規(guī)格: 20mg
梔子 對照品 CAS * 規(guī)格: 1g
乃近 對照品 CAS * 規(guī)格: 200mg
四環(huán)素 對照品 CAS * 規(guī)格: 100mg;97.6%
澤瀉醇A-24-醋酸酯;Alisol A CAS 18674-16-3 * 規(guī)格: 10mg
紫蘇葶;Perillartine CAS 30950-27-7 * 規(guī)格: 20mg
堿;EMetine Hydroc CAS * 規(guī)格: 20mg
葫蘆巴堿;Trigonelline CAS 6138-41-6 * 規(guī)格: 20mg
蕓香柚皮苷;Narirutin CAS 14259-46-2 * 規(guī)格: 20mg
銀杏內(nèi)酯C;Ginkgolide C CAS 15291-76-6 * 規(guī)格: 20mg
血竭素;Cochinchinenin CAS 400603-95-4 * 規(guī)格: 20mg
流感嗜血桿菌型PCR檢測試劑盒說明書3,4-二氯硝 192 3,4- two*:99-54-7分子量: C6H3Cl2NO2
3,4二氟芐氨 388.1 3,4 two f*:17788-94-2分子量: C18H12Br2
亞二氫鉀(晶體) 120.09 Potassium dihydrogen phosphite (crystal)*:13977-65-6分子量: H2KO3P
3-羥 101.15 3- piperidine*:6859-99-0分子量: C5H11NO
2-氯-5-溴吡 192.44 2- -5- bromide*:53939-30-3分子量: C5H3BrClN
2-溴-6-羧吡 202.01 2- -6- group*:21190-87-4分子量: C6H4BrNO2
間三氟甲氯芐 194.58 Between three f*:705-29-3分子量: C8H6ClF3
2,4-二甲-5-乙酰噻唑 155.22 2,4-二甲- 5 -乙酰噻唑*:38205-60-6分子量: C7H9NOS
5-甲-2-乙酰呋 124.14 5- methyl -2- acetyl*:1193-79-9分子量: C7H8O2
1,2-二氯-4-氟-5-硝 209.99 1,2- two -4- -5-*:2339-78-8分子量: C6H2Cl2FNO2
(R)-1-芐-3-雙酸 226.74566 (R) -1- benzyl -3- 3-aminopiperidine 2HCl*:分子量: C12H19ClN2
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