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技術(shù)原理：
 DNA的半保留復(fù)制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。

注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
?
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

前胡（白花前胡） CAS  *  規(guī)格： 1g

葡醛內(nèi)酯 CAS  *  規(guī)格： 50mg/支

原薯蕷皂苷 CAS  *  規(guī)格： 20mg

2,6-二-4-(3-基)-3 CAS  *  規(guī)格： 50mg/支

歐前胡素 CAS  *  規(guī)格： 20mg

維A酸 CAS  *  規(guī)格： 100mg

丁咯地爾 CAS 35543-24-9 *  規(guī)格： 100mg

大葉骨碎樸 CAS  *  規(guī)格： 3g

獾油 CAS  *  規(guī)格： 2.5ml

獨活(重齒毛當(dāng)歸) CAS  *  規(guī)格： 1g

膦鈉 CAS  *  規(guī)格： 100mg

氫噻嗪 CAS 58-93-5 *  規(guī)格： 100mg

磺胺脒 CAS 57-67-0 *  規(guī)格： 100mg

4-羥基間苯二 CAS  *  規(guī)格： 50mg

富馬酸盧帕他定 CAS  *  規(guī)格： 100mg

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葡枝根霉 Rhizopus stolonifer釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

貝葉多孔菌哈茨木霉

黃芪甲苷人食管細(xì)胞

大鼠肝星形細(xì)胞*培養(yǎng)基ACHN, 人腎細(xì)胞腺細(xì)胞

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae屎腸球菌 Enterococcus faecium

涇陽鏈霉菌 Streptomyces jingyangensis香菇 Lentinula edodes

NCI-H446(人小細(xì)胞肺細(xì)胞)CHL(倉鼠肺細(xì)胞)

桂色曲霉 Aspergillus cinnamomeus釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti紫團孢鏈霉菌 Streptomyces violaceoagglomeratus

NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L](小鼠成纖維人內(nèi)臟脂肪細(xì)胞*培養(yǎng)基

斯氏油脂酵母 Lipomyces starkeyiRN-s, 大鼠紋狀體神經(jīng)元

稻梨孢 Pyricularia oryzae扣囊復(fù)膜孢酵母 Saccharomycopsis fibuligera

人間充質(zhì)干細(xì)胞-臍帶玫瑰褐鏈霉菌 Streptomyces roseofuscus

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiaeAGS人胃腺細(xì)胞

漢遜德巴利酵母 Bacillus thuringiensis釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae