目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>PCR試劑盒>>PCR檢測(cè)試劑盒>> 50次轉(zhuǎn)輪蟹通用PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格
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更新時(shí)間:2023-12-17 13:38:40瀏覽次數(shù):205評(píng)價(jià)
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原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
轉(zhuǎn)輪蟹通用PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格 | Ixoides spp.PCR | BK-P9314 |
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實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
技術(shù)原理:
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個(gè)循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。
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轉(zhuǎn)輪蟹通用PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格羅丹明標(biāo)記的兔抗人IgM 0.3mlRabbit Anti-human IgM/RBITC
Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗猴IgM 0.1mlRabbit Anti-MK IgM/Alexa Fluor 350
PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗大鼠IgM 0.1mlRabbit Anti-rat IgM/PE-Cy5.5
Alexa Fluor 555標(biāo)記的驢抗人IgG 0.1mlDonkey Anti-human IgG/Alexa Fluor 555
β淀粉樣肽1-28(多肽蛋白) 0.5mgBeta-Amyloid(1-28)
金屬蛋白酶組織抑制因子-2(抗原) 0.5mgTIMP-2(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2)
免疫球蛋白結(jié)合蛋白-1 0.5mgImmunoglobuin binding protein-1(CD79A)IGBP-1
G蛋白偶聯(lián)受體-2(抗原) 0.5mgCKR-L2( G protein-coupled receptor-2 )
磷酸化活化復(fù)制因子2抗原 0.5mgphospho-ATF2(pSer490/pSer498)
風(fēng)疹病毒糖蛋白多肽片段 0.5mgglycoprotein (E1 glycoprotein) [Rubella virus]
嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白14抗原 0.5mgCCL14/HCC-1(C-C motif chemokine 14)
細(xì)胞角蛋白14抗原 0.5mgCK14/17/42/10 peptide
多能發(fā)育相關(guān)基因2抗原 0.5mgDPPA2 (developmental pluripotency associated gene2)
磷酸化神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43抗原 0.5mgphospho GAP-43(pSer41)(phospho Growth associated protein 43 )
血紅素氧合酶-1/熱休克蛋白-32抗原 0.5mgHO-1/HSP32(Hemeo xygenase 1)
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)