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原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
乳酸乳球菌PCR檢測試劑盒價格 | Lactococcus lactis PCR | BK-P9330 |
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
技術(shù)原理:
DNA的半保留復(fù)制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應(yīng)實驗中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。
小鼠可溶性白細胞分化抗原30配體(sCD30L)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠可溶性白細胞分化抗原30(sCD30)Elisa 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠可溶性P選擇素(sP-selectin)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠可溶性Endoglin(ENG/sCD105)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠顆粒酶B(Gzms-B)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠顆粒酶A(Gzms-A)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠抗內(nèi)膜抗體(EMAb)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠抗中性粒細胞核周抗體(pANCA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠抗增殖細胞核抗原抗體(PCNA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠抗胰蛋白酶(AT)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
小鼠抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
乳酸乳球菌PCR檢測試劑盒價格磷酸化信號轉(zhuǎn)導與轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:phospho-STAT1 (Ser727)
磷酸化14-3-3 α/β/ζ抗體 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:phospho-14-3-3 protein zeta + delta (Ser58)
突觸結(jié)合蛋白12抗體 規(guī)格: 0.2ml 英文名稱:Synaptotagmin XII
信號傳導T淋巴細胞活化相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml 英文名稱:SH2D1A
羊抗兔IgG 1mgGoat Anti-rabbit IgG
辣根過氧化物酶標記的兔抗牛IgM 0.1mlRabbit Anti-Bovine IgM/HRP
辣根過氧化物酶標記的羊抗小鼠IgG 0.1mlGoat Anti-Mouse IgG/HRP
FITC標記的兔抗小鼠IgG-Fc 0.1mlRabbit Anti-mouse IgG-Fc/FITC
Cy7標記的兔抗馬IgM 0.1mlRabbit Anti-horse IgM/Cy7
PE-Cy5.5標記的羊抗豚鼠IgG 0.1mlGoat Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy5.5
Alexa Fluor 488標記的小鼠抗人IgG 0.1mlMouse Anti-human IgG/Alexa Fluor 488
Cy5.5標記的小鼠抗大鼠IgG 0.1mlMouse Anti-rat IgG/Cy5.5
Alexa Fluor 555標記的兔抗親和素 0.1mlRabbit Anti-Avidin/Alexa Fluor 555
Alexa Fluor 350標記的兔抗雞IgM 0.1mlRabbit Anti-chicken IgM/Alexa Fluor 350
辣根過氧化物酶標記的兔抗羊IgM 0.1mlRabbit Anti-Goat IgM/HRP