目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>PCR試劑盒>>PCR檢測試劑盒>> 50次膿腫分枝桿菌規(guī)格
技術(shù)原理:
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實驗中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。
注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
膿腫分枝桿菌規(guī)格 | Mycobacterium abscessus complex | BK-P9415 |
原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
?
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
人髓鞘堿性蛋白抗體(MBP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
人髓磷脂堿性蛋白(MBP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
人髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
人髓過氧化物酶(MPO)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
人酸性神經(jīng)鞘磷脂酶(ASM)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
人酸性磷酸酶(ACP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
人酸性成纖維細(xì)胞生長因子1(aFGF-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
人松弛肽/松弛素(RLN)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
人絲狀血球凝集素(FHA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
人絲裂原激活的蛋白激酶/MAP激酶(MAPK)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
人絲氨酸蛋白酶(PRSS)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
人絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶(STK)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
人水蛭素(Hirudin)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
人水通道蛋白5(AQP-5)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
膿腫分枝桿菌規(guī)格白細(xì)胞介素19抗體 規(guī)格: 0.2ml 英文名稱:IL-19
白介素1α前肽/IL-1α前肽抗體 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:IL-1 Alpha Propeptide
干擾素β抗體 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:IFN-Beta
抑制素結(jié)合蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml 英文名稱:IGSF1
胰島素樣生長因子-II抗體 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:IGF II
磷酸化胰島素受體底物2抗體 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:phospho-IRS-2(Ser731)
胰島素樣生長因子2 mRNA 結(jié)合蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml 英文名稱:IGF2BP3
磷酸化活化蛋白激酶D抗體 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:phospho-JunD(Ser255)
Kelch樣蛋白31抗體 規(guī)格: 0.2ml 英文名稱:KLHL31
磷酸化原癌基因c-kit抗體 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:Phospho-c-Kit(Ser721)
磷酸化電壓門控性鉀通道蛋白Kv4.2抗體 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:phospho-Kv4.2(Thr602)
乳酸脫氫酶D抗體 規(guī)格: 0.2ml 英文名稱:LDHD
核纖層蛋白B2抗體 規(guī)格: 0.2ml 英文名稱:Lamin B2
白細(xì)胞細(xì)胞化學(xué)吸引素2抗體 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:LECT2
層粘蛋白α2抗體 規(guī)格: 0.1ml 英文名稱:Laminin 2 alpha
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