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目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測試劑盒>>糖代謝系列>> 苯胺4羥化酶(AH)測試盒微量法

苯胺4羥化酶(AH)測試盒微量法
  • 苯胺4羥化酶(AH)測試盒微量法
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貨號(hào) BK-01S6787
苯胺4羥化酶(AH)測試盒微量法公司正在出售的產(chǎn)品:乳糖膽鹽發(fā)酵 進(jìn)口、國產(chǎn)Lactose Bile Broth用于大腸菌群,糞大腸菌群,大腸桿菌的測定(GB標(biāo)準(zhǔn))250乳糖復(fù)發(fā)酵 進(jìn)口、國產(chǎn)Lactose Broth用于大腸菌群,糞大腸菌群,大腸桿菌的測定(GB標(biāo)準(zhǔn))250去氧膽酸鹽瓊脂 進(jìn)口、國產(chǎn)Desoxycholate Lactose Agar用于大腸桿菌固體平板測定

商品介紹:

測定意義:

細(xì)胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶,在外源物質(zhì)代謝中具有重要作用,尤其是藥物和毒物的代謝。AHP450酶系中相當(dāng)于CYP2E1亞型,CYP2E1不僅參與了藥物的代謝,而且還能催化多種前致癌物和前毒物的活化過程。

測定原理:

AH催化苯胺羥化后產(chǎn)生的4-氨基酚,進(jìn)一步轉(zhuǎn)變?yōu)榉?/span>-吲哚復(fù)合物,在630nm處有特征吸收峰;通過測定630nm吸光度增加速率,來計(jì)算AH活性。

自備儀器及用品:

普通離心機(jī)、超速離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、雙蒸水和冰。

提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測,7個(gè)工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

檢測方法

貨號(hào)

苯胺4羥化酶(AH)測試盒微量法

100管/48樣

微量法

BK-01S6787

11.png 

實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招:

1、定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。

3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對(duì)照,與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:

① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封,放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。

② 與水蒸氣,水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封,并遠(yuǎn)離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑,應(yīng)將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存,其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng),所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風(fēng)處保存。

操作步驟:

1. 樣品的準(zhǔn)備:

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集細(xì)胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備:動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋,即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進(jìn)行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對(duì)于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。

遠(yuǎn)藤氏瓊脂 Endo Agar 250g

1瓶 MDA-MB-468細(xì)胞株 MDA-MB-468 低溫運(yùn)輸和保存

西蒙氏枸櫞酸鹽瓊脂 Simmons Citrate Agar 250g

5g N- 乙酰 -D- 氨基葡萄糖 Acetyl-D-Glucosamine ?20℃保存

250mL TE Buffer,20X,pH7.6 TE Buffer,20X,pH7.6 常溫保存

50mL DEAE交換介質(zhì) DEAE Medium 常溫干燥封袋保存

2 ug pSV-beta-galactosidase pSV-beta-galactosidase 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

100mL RNase-free 鹽酸胍溶液,8M  常溫

2 ug pCSN44 pCSN44 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

動(dòng)力  250g

10g 羅丹明 B Rhodamine B 室溫干燥保存

苯胺4羥化酶(AH)測試盒微量法CX3CL1  CX3CL1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Mouse Anti-rabbit IgG/Gold  膠體金標(biāo)記的小鼠抗兔IgG 規(guī)格: 0.5ml

SH3TC2  脫髓鞘相關(guān)蛋白SH3TC2N抗體 規(guī)格: 0.2ml

RNF187  環(huán)指蛋白187抗體 規(guī)格: 0.2ml

ROCK2  Rho相關(guān)蛋白激2抗體 規(guī)格: 0.1ml

VGLL4  轉(zhuǎn)錄輔助因子退變樣蛋白4抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-PAK2 (Ser20)  磷酸化p21激活激2抗體 規(guī)格: 0.1ml

EIF2C1/Ago1  真核翻譯起始因子2C1抗體 規(guī)格: 0.2ml

L-enk  亮腦啡肽抗體 規(guī)格: 0.1ml

DCUN1D2  DCN1樣蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

c-ABL1/2(Tyr393/429)  磷酸化非受體酪激c-Abl抗體 規(guī)格: 0.1ml

EIG121  雌激素誘導(dǎo)基因121蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

 


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