目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>脂肪酸代謝系列>> 磷脂酶D(PLD)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法
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更新時(shí)間：2023-12-26 18:44:27瀏覽次數(shù)：590評(píng)價(jià)
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| 貨號(hào) | BK-01S6656 |
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特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱：磷脂酶D(PLD)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
檢測(cè)方法：可見(jiàn)分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào)：BK-01S6656
產(chǎn)品分類：脂肪酸代謝系列
商品介紹：
測(cè)定意義: 磷脂酶D（EC3.1.4.4）即磷脂酰水解酶，是催化磷酸二酯鍵水解和堿基交換反應(yīng)的一類酶的總稱，廣泛存在于高等動(dòng)植物和細(xì)菌等多種生物體中，具有參與細(xì)胞脂質(zhì)代謝、信號(hào)傳導(dǎo)、生物膜形成的抗逆境脅等生理功能。 測(cè)定原理 磷脂酶D催化水解磷脂酰末端的磷脂酰二酯鍵生成磷脂酸和，在氧化酶催化作用下生成甜菜堿和過(guò)氧化氫，過(guò)氧化氫在過(guò)氧化氫酶的作用下將4-氨基和重蒸酚氧化成粉紅色物質(zhì)，在500nm處有特征吸收峰。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 天平、研缽、超速冷凍離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋，無(wú)水乙醇。 |
所需的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測(cè)定：
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測(cè)液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測(cè)；若渾濁，離心后取上清檢測(cè)。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤(rùn)管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些?？梢匀?.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤(rùn)管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
50次 植物RNAout Plant RNAOUT 4℃保存
2 ug pCEP4 pCEP4 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
馬鈴薯葡萄糖半固體瓊脂 Potato Dextrose Semisolid Agar 250g
500mg 硝苯吡啶 Nifedipine 4℃保存
50T 禽呼腸孤病毒PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
10 mg Hydroxystilbamidine Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
250mL BSA Blocking Buffer in TBS BSA Blocking Buffer in TBS 常溫保存
3g DNA UV防護(hù)劑 NDAUV Erasol 4℃保存
2 ug pGL4.10 pGL4.10 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
增菌肉湯培養(yǎng)基E Enrichmentbroth medium E 250g
1瓶 Hep-2[Hep2]細(xì)胞株 Hep-2[Hep2] 低溫運(yùn)輸和保存
磷脂酶D(PLD)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法EphB2 R 酪蛋白激受體B2抗體 規(guī)格: 0.1ml
IRX5 Iroquois同源蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-MYPT1/MBS(Ser507) 磷酸化肌球蛋酸抗體 規(guī)格: 0.1ml
Myoglobin 肌紅蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
CLPTM1 唇裂和腭裂相關(guān)跨膜蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
PJA2/RNF131 環(huán)指蛋白131抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rad52 Rad52抗體 規(guī)格: 0.1ml
H5N1 Hemagglutinin A型毒H5N1凝集素 規(guī)格: 1ml
LBP1/Upstream Binding Protein 1 上游結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
ABCG1 三磷酸苷結(jié)合盒亞家族G1抗體 0.1ml
PCGF3/RNF3 環(huán)指蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml
RABX5/Rabex5 G蛋白相關(guān)RABX5抗體 規(guī)格: 0.2ml
注意事項(xiàng)：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管，對(duì)照管數(shù)值在什么范圍？
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是（1）試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒(méi)有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min）。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè)，通?？梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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