目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>糖酵解系列>> 3磷酸甘油酸激酶(PGK)測(cè)試盒紫外分光光度法
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更新時(shí)間：2023-12-27 07:30:34瀏覽次數(shù)：673評(píng)價(jià)
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| 貨號(hào) | BK-01S6616 |
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實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤(rùn)管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些?？梢匀?.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤(rùn)管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱：3磷酸甘油酸激酶(PGK)測(cè)試盒紫外分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
檢測(cè)方法：紫外分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào)：BK-01S6616
產(chǎn)品分類：糖酵解系列
商品介紹：
測(cè)定意義: 3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的關(guān)鍵酶，廣泛存在于動(dòng)植物和微生物體內(nèi)，催化1，3-二磷酸甘油酸轉(zhuǎn)變?yōu)?/span>3-磷酸甘油酸，產(chǎn)生1分子ATP，具有影響DNA復(fù)制和修補(bǔ)及刺激病毒RNA合成等生物學(xué)功能，廣泛應(yīng)用于藥物靶標(biāo)設(shè)計(jì)。 測(cè)定原理 3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP產(chǎn)生1,3-二磷酸甘油酸和ADP，1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脫氫酶和NADH作用下產(chǎn)生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸，340nm處的吸光度變化反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 天平、低溫離心機(jī)、研缽、紫外分光光度計(jì)、1 mL石英比色皿。 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測(cè)定：
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測(cè)液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測(cè)；若渾濁，離心后取上清檢測(cè)。 |
注意事項(xiàng)：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管，對(duì)照管數(shù)值在什么范圍？
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是（1）試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒(méi)有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min）。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè)，通?？梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
改良馬丁培養(yǎng)基 Martin Broth,Modified 250g
1瓶 BV2細(xì)胞株 BV2 低溫運(yùn)輸和保存
100mL RNase-free SDS溶液,10% 常溫
250U KOD DNA聚合 KOD DNA Polymerase -20℃保存
100mL PEG 3350 Solution,50% PEG 3350 Solution,50% 常溫保存
0.1mL×10 DH5α化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 DH5α Competent Cell -80℃保存
2 ug pNI_v2 pNI_v2 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
MS培養(yǎng)基（含瓊脂，不含蔗糖） 250g
1瓶 THLE-3細(xì)胞株 THLE-3 低溫運(yùn)輸和保存
賴鐵瓊脂（LIA） Lysine Iron Agar 250g
1g 熒光增白劑 28 Fluorescent Brightener 28 室溫干燥保存
3磷酸甘油酸激酶(PGK)測(cè)試盒紫外分光光度法EphA2/Eph receptor A2 內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白酪激抗體 規(guī)格: 0.1ml
Fetuin beta 胎球蛋白B抗體(Fetuin β) 規(guī)格: 0.2ml
PBEF1(CT) 內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(C端抗體) 規(guī)格: 0.1ml
PDHA1/PDH-E1α 丙酮酸脫α1抗體 規(guī)格: 0.2ml
PRB2/p130 視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白p130抗體 規(guī)格: 0.1ml
PRKCQ/PKC theta 蛋白激C theta抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-PRKCZ(Thr500) 磷酸化蛋白激C(T500)抗體 規(guī)格: 0.2ml
PRRSV-GP5 豬藍(lán)耳毒GP5蛋白抗體 規(guī)格: 1ml
Mouse Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的小鼠抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-Smad2(Thr220) 磷酸化細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD2抗體 規(guī)格: 0.1ml
UBOX5/RNF37 泛素結(jié)合7相互作用蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2ml
SLC26A4 鈉碘單獨(dú)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SLC26A4抗體 規(guī)格: 0.1ml
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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