目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測試劑盒>>糖酵解系列>> 丙酮酸激酶（PK）測試盒紫外分光光度法
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更新時(shí)間：2023-12-27 08:14:49瀏覽次數(shù)：834評(píng)價(jià)
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| 貨號(hào) | BK-01S6604 |
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實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些?？梢匀?.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱：丙酮酸激酶（PK）測試盒紫外分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
檢測方法：紫外分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào)：BK-01S6604
產(chǎn)品分類：糖酵解系列
商品介紹：
測定意義: PK（EC 2.7.1.40）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化糖酵解過程中的最后一步反應(yīng)，是糖酵解過程中的主要限速酶之一，也是產(chǎn)生ATP的關(guān)鍵酶之一，因此測定PK活性具有重要意義。 測定原理 PK催化磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成ATP和丙酮酸，乳酸脫氫酶進(jìn)一步催化NADH和丙酮酸生成乳酸和NAD+，在340nm下測定NADH下降速率，即可反映PK活性。 需自備的儀器和用品 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。 |
注意事項(xiàng)：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對(duì)照管，對(duì)照管數(shù)值在什么范圍？
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長到40min）。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對(duì)照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通?？梢允箿y定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
100mL 加拿大樹膠 Canada Balsam 室溫避光保存
250mL Veronal Buffered Saline (VBS) Veronal Buffered Saline (VBS) 常溫保存
5mL Tricine-SDS-PAGE上樣液 Tricine-SDS-PAGE Loading Buffer -20℃保存
2 ug pUC 18 pUC 18 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
30次 柱式石蠟包埋組織DNAout
2 ug pEGFP- C2 pEGFP- C2 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
K1 vitamin K1 1g
2 ug pET-22b(+) pET-22b(+) 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
125mL Saponine Permeating Solution in PBS（皂素PBS滲透液）,5X Saponine Permeating Solution in PBS,5X 常溫保存
1 管 Orgami B大腸桿菌 Origami B E.coli Strain -80℃保存
2 ug pROK2 pROK2 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
丙酮酸激酶（PK）測試盒紫外分光光度法phospho-Alpha synuclein (Tyr125) 磷酸化核突觸蛋白α抗體 規(guī)格: 0.1ml
RAC1+RAC2 GTP結(jié)合蛋白R(shí)AC1+RAC2抗體 規(guī)格: 0.2ml
TM4SF3 TM4SF3蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-Mouse IgM/RBITC 羅丹明標(biāo)記的羊抗小鼠IgM 規(guī)格: 0.3mlRabbit Anti-Goat IgM/RBITC 羅丹明標(biāo)記的兔抗羊IgM 規(guī)格: 0.3ml
PCDHA9 原鈣粘附蛋白α9抗體 規(guī)格: 0.2mlABHD4 α/β水解4抗體 規(guī)格: 0.2ml
DGCR2 DGCR2蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlRLBP1L1 結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
GPR49/LGR5 G蛋白偶聯(lián)受體49抗體 規(guī)格: 0.1mlCYP2R1 細(xì)胞色素P450 2R1抗體 規(guī)格: 0.2ml
ER-Alpha 雌激素受體α抗體（用于western blot） 規(guī)格: 0.1mlDonkey Anti-Guinea pig IgG/PE PE標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
CARD11 凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體 規(guī)格: 0.2mlSLC34A2 磷酸鈉協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-horse IgG/AP 堿性磷酸（AP）標(biāo)記的兔抗馬IgG 規(guī)格: 0.1mlRFESD RFESD蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Hsp93 植物熱休克蛋白93抗體 規(guī)格: 1mlFAM166A FAM166A蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
B7-1/CD80 刺激分子B7-1蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlPSRC1 富含脯/絲卷曲螺旋蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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