目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測試劑盒>>三羧酸循環(huán)系列>> 丙酮酸脫氫酶(PDH)測試盒微量法
貨號 | BK-01S6577 |
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實驗結(jié)果判斷我有妙招:
1、定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:
① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風(fēng)、遠離火源處保存。
② 與水蒸氣,水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封,并遠離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑,應(yīng)將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存,其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng),所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風(fēng)處保存。
本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
丙酮酸脫氫酶(PDH)測試盒微量法 | 100管/96樣 | 微量法 | BK-01S6577 |
商品介紹:
測定意義: PDH(EC 4.1.1.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是丙酮酸脫氫酶復(fù)合體(PDHC)催化丙酮酸氧化脫羧的限速酶,催化丙酮酸脫梭生成-TPP,把糖酵解和三羧酸循環(huán)連接起來。 測定原理 PDH催化丙酮酸脫氫,同時還原WST-8產(chǎn)生黃色物質(zhì),從而導(dǎo)致450nm光吸收的增加。 可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑組成和配制:
提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
操作步驟:
1. 樣品的準備:
a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當(dāng)天測定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
100mL CAPS Buffer,0.5M,pH10.0 CAPS Buffer,0.5M,pH10.0 常溫保存
40次 miRNA PAGE膠回收試劑盒 miRNABACK 4℃保存
2 ug pGL4.29[Luc2P/CRE/Hygro] pGL4.29[Luc2P/CRE/Hygro] 低溫運輸,-20℃保存
PLET瓊脂基礎(chǔ) PLET Agar Base 250g
1瓶 HFSF細胞株 HFSF 低溫運輸和保存
堿性蛋白胨水管(10ml) Alkaline peptone water 10ml*20
1瓶 L929細胞株 L929 低溫運輸和保存
2 ug RCIscript-GoldyTALEN RCIscript-GoldyTALEN 低溫運輸,-20℃保存
50次 一步法單菌落質(zhì)粒 DNAout One-Step Colony Plasmid DNAOUT 常溫
2 ug pET-45b(+) pET-45b(+) 低溫運輸,-20℃保存
乙酰胺肉湯 Acetamide broth 250g
丙酮酸脫氫酶(PDH)測試盒微量法Plakophilin 1 橋粒斑菲素蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
NBL1/DAND1 神經(jīng)母細胞瘤抑瘤蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-EGFR (Tyr998) 磷酸化表皮生因子受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
Donkey Anti-human IgG/Bio 標記的驢抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml
Bim/BCL2L11 細胞死亡調(diào)解子抗體 規(guī)格: 0.1ml
MAG-a/L-MAG 髓鞘相關(guān)糖蛋白-a抗體 規(guī)格: 0.1ml
KIF20A/MKLP2 有絲分裂驅(qū)動蛋白樣2抗體 規(guī)格: 0.2ml
ApoB/Apolipoprotein B 載脂蛋白B抗體 規(guī)格: 0.1ml
TCN2/Transcobalamin II 轉(zhuǎn)鈷胺素蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Filamin A/FLNA 細絲蛋白A抗體 規(guī)格: 0.2ml
KRAS 原基因K-ras抗體 規(guī)格: 0.1ml
IRF-1/MAR1 干擾素調(diào)節(jié)因子1抗體 規(guī)格: 0.2ml