目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測試劑盒>>氧化與抗氧化系列>> 查爾酮異構(gòu)酶(CHI)測試盒可見分光光度法
貨號 | BK-01S6469 |
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商品介紹:
測定意義: 查爾酮異構(gòu)酶(Chalcone isomerase, CHI)是個被認(rèn)識的黃酮類化合物合成相關(guān)酶,也是黃酮代謝途徑中的關(guān)鍵酶之一。查爾酮異構(gòu)酶和查爾酮合酶一起構(gòu)成了黃酮類化合物生物合成的限速酶。 測定原理: 查爾酮異構(gòu)酶(CHI)催化查爾酮環(huán)化形成 4,5,7-三羥基黃烷酮,通過測定381nm下的吸光度變化表示CHI的活性。 需自備的儀器和用品: 可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
查爾酮異構(gòu)酶(CHI)測試盒可見分光光度法 | 50管/48樣 | 可見分光光度法 | BK-01S6469 |
實驗結(jié)果判斷我有妙招:
1、定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:
① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。
② 與水蒸氣,水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封,并遠(yuǎn)離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑,應(yīng)將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存,其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng),所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風(fēng)處保存。
操作步驟:
1. 樣品的準(zhǔn)備:
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集細(xì)胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
10mL ONPG溶液,10mg/mL O-Nitrophenyl-β-D-Galactopyranoside -20℃干燥避光保存
100mL Kinase Buffer IV,5X Kinase Buffer IV,5X 常溫保存
5ug Oligo dT12-18引物 Oligo dT12-18 Primer -20℃保存
2 ug pLVPTH2-tTR-KRAB-Cerulean-non_shRNA_control (2041 ng) pLVPTH2-tTR-KRAB-Cerulean-non_shRNA_control (2041 ng) 低溫運輸,-20℃保存
FWA淡水魚類瓊脂培養(yǎng)基 250g
1瓶 NCTC 1469 [NCTC1469]細(xì)胞株 NCTC 1469 [NCTC1469] 低溫運輸和保存
阪崎腸桿菌分離瓊脂(ESIATM) Enterobacter Sakazakii Isolation Agar 250g
5g N,N- 雙 (2- )-3- 氨基乙磺酸 BES 室溫避光保存
500mL Tris-HCl Buffer,1.0M,pH8.8 Tris-HCl Buffer,1.0M,pH8.8 常溫保存
2×0.5mL 蛋白抑制劑混合液 Protease Inhibitor Cocktail -20℃保存
2 ug pTRV1 pTRV1 低溫運輸,-20℃保存
查爾酮異構(gòu)酶(CHI)測試盒可見分光光度法ECM1 細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
GTPBP4/CRFG GTP結(jié)合蛋白4抗體(慢性功能衰竭蛋白) 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Bovine IgM/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的兔抗牛IgM 規(guī)格: 0.1ml
RNF148 環(huán)指蛋白148抗體 規(guī)格: 0.2ml
IFNAR1 干擾素α受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
NESG1/CCDC19 鼻咽上皮細(xì)胞特異性蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
E1 glycoprotein 毒糖蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
P-CK/Cytokeratin AE1 + AE3 廣譜細(xì)胞角蛋白PCK抗體 規(guī)格: 0.1ml
Donkey Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
FBXO31 F-box蛋白家族FBXO31抗體 規(guī)格: 0.2ml
CETP 酯轉(zhuǎn)移蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
CPB2/Carboxypeptidase B2 胰羧肽B2抗體 規(guī)格: 0.2ml
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)