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目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>輔酶Ⅱ系列>> 蔗糖磷酸化酶(SP)測(cè)試盒微量法

蔗糖磷酸化酶(SP)測(cè)試盒微量法
  • 蔗糖磷酸化酶(SP)測(cè)試盒微量法
參考價(jià) 面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
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更新時(shí)間:2023-12-29 07:31:18瀏覽次數(shù):590評(píng)價(jià)

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貨號(hào) BK-01S6367
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本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測(cè),7個(gè)工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

檢測(cè)方法

貨號(hào)

蔗糖磷酸化酶(SP)測(cè)試盒微量法

100管/96樣

微量法

BK-01S6367

商品介紹:

測(cè)定意義:

SP(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中,裂解葡萄糖苷鍵,催化葡萄糖基轉(zhuǎn)移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等,合成相應(yīng)的葡萄糖基低聚糖。此外,SP還能催化合成熊果苷,具有的美白效果,在化妝品工業(yè)中具有重要應(yīng)用。

測(cè)定原理:

SP能夠以磷酸為受體,催化蔗糖產(chǎn)生1-磷酸葡萄糖,在葡萄糖磷酸變位酶催化下變位為6-磷酸葡萄糖,在6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下還原NADP+生成NADPH,導(dǎo)致340nm光吸收值增加。測(cè)定340nm吸光度增加速率,即可計(jì)算SP活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制:

提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招:

1、定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。

3、以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照,與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:

① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封,放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。

② 與水蒸氣,水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封,并遠(yuǎn)離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑,應(yīng)將其固體或晶體密封保存,不宜長(zhǎng)期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存,其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng),所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風(fēng)處保存。

 

操作步驟:

1. 樣品的準(zhǔn)備:

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集細(xì)胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備:動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(P1511)測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測(cè)定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋,即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升,參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說(shuō)明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽(yáng)性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。

2 ug pWHERE pWHERE 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

50次 真菌DNAout Fungal DNAOUT 常溫

2 ug pESC-TRP pESC-TRP 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

李斯特氏菌檢驗(yàn)檢驗(yàn)培養(yǎng)基  

100mg 鹽酸萬(wàn) Vancomycin Hydrochloride -20℃保存

50T 轉(zhuǎn)基因植物EPSPS基因PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸,-20℃保存

5mg 羅丹明 123 Rhodamine 123 室溫干燥保存

50mL Magnesium Acetate Solution(乙酸鎂溶液),1M  Magnesium Acetate Solution,1M  常溫保存

50次 SP6體外轉(zhuǎn)錄試劑盒 SP7 in vitro Transcription Kit -20℃保存

2 ug pLVX-EF1α-AcGFP1-C1 pLVX-EF1α-AcGFP1-C1 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

假單胞分離肉湯 Pseudomonas Isolation Broth 250g

蔗糖磷酸化酶(SP)測(cè)試盒微量法phospho-P53(Thr18)  磷酸化瘤抑制基因P53抗體 規(guī)格: 0.1ml

IGFBP4/IBP4  胰島素樣生因子結(jié)合蛋白4抗體 規(guī)格: 0.1ml

Dog IgM/Cy5  Cy5標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體 規(guī)格: 0.1ml

EGFR5/CLEC14A  表皮生因子受體5抗體 規(guī)格: 0.2ml

Cyclin B3  周期素B3抗體 規(guī)格: 0.2ml

HDAC9  組蛋白去乙?;?抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-mouse IgG/PE-Cy7  PE-Cy7標(biāo)記的兔抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlCDC2L1  細(xì)胞分裂周期蛋白2亞型1抗體 規(guī)格: 0.2ml

CD5L/Api6  CD5L抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Biotin/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗抗體IgG 規(guī)格: 0.1ml

MYOM2  肌間蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2mlMVK  甲羥戊酸激抗體 規(guī)格: 0.2ml

IL-6  白介素6抗體 規(guī)格: 0.1mlGLP-1(1G9)  GLP-1單克隆抗體 規(guī)格: 0.1ml

CABLES2  細(xì)胞周期蛋白依賴性激CABLES2抗體 規(guī)格: 0.2mlGentamicin  抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-Bov IgG/PE  PE標(biāo)記的兔抗牛IgG  規(guī)格: 0.1mlPhospho-PLC gamma 1(Ser1248)  磷酸化磷酯Cγ1抗體 規(guī)格: 0.1ml

 


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