目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測試劑盒>>其它系列>> γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γGT)測試盒可見分光光度法
貨號 | BK-01S6386 |
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特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱:γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γGT)測試盒可見分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
檢測方法:可見分光光度法
產(chǎn)品貨號:BK-01S6386
產(chǎn)品分類:
商品介紹:
測定意義: γ-GT是γ-谷氨酰循環(huán)中的關(guān)鍵酶,催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨?;D(zhuǎn)移到受體。也可以催化GSH和其他γ-谷氨酰基化合物的水解,產(chǎn)生谷鹽,在細胞外新陳代謝中起了重要的作用。 測定原理: γ-GT催化谷氨酰對硝基苯胺中γ-谷氨?;D(zhuǎn)移給N-甘氨酰甘,生成對硝基苯胺,在405nm有特征光吸收;通過測定405nm光吸收增加速率,來計算γ-GT酶活性。 自備儀器和用品: 低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗
樣本和試劑浪費!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取
| ② 細菌/細胞樣本: 先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。 |
實驗方法學:
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
50次 分枝桿菌RNAout
2 ug pCMV5-300 pCMV5-300 低溫運輸,-20℃保存
檢定培養(yǎng)基 Test Medium 250g
100mg Poly r(A) Poly r(A) -20℃保存
500mL Phosphate Buffer,0.2M, pH7.6 Phosphate Buffer,0.2M, pH7.6 常溫保存
5nmol 接頭DNA(BamH I(Bgl II)-Sma I接頭) Adaptors -20℃保存
2 ug pMW29 pMW29 低溫運輸,-20℃保存
knudson C 培養(yǎng)基 knudson C Medium 250g
1瓶 SW480細胞株 SW480 低溫運輸和保存
WS瓊脂 WS Salmonella Agar 250g
25g 乙烯利 Ethrel 4℃保存
γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γGT)測試盒可見分光光度法AKT2 蛋白激B2 規(guī)格: 0.1ml
phospho-FRS2(Tyr436) 磷酸化成纖維細胞生因子受體底物2抗體 規(guī)格: 0.1ml
Syndecan 2/heparin sulphate protoglycans 1 硫酸肝素糖蛋白1抗體抗體 規(guī)格: 0.2ml
NFEM5/IRF4/MUM1 淋巴細胞特異性干擾素調(diào)節(jié)因子抗體 規(guī)格: 0.2mlEpigen 上皮細胞有絲分裂蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
CKMT/Creatine kinase MT 酸性型線粒體肌酸激抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Goat IgG/AP 堿性磷酸(AP)標記的兔抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit anti-MG IgG/PE-CY5 PE-CY5標記的兔抗爪沙鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlCCDC90A 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白90A抗體 規(guī)格: 0.2ml
KAT3B/Ep300 轉(zhuǎn)錄接蛋白EP300抗體 規(guī)格: 0.2mlCCDC124 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白124抗體 規(guī)格: 0.2ml
Collagen V Ⅴ型膠原抗體 規(guī)格: 0.1mlBCAS2 相關(guān)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-Goat IgG/Gold 膠體金標記的兔抗羊IgG 規(guī)格: 0.5mlADRA1/ADRA1B/alpha 1 Adrenergic Receptor alpha 1上素能受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-HSP27 (Ser254) 磷酸化熱休克蛋白27抗體 規(guī)格: 0.1mlNCE2 泛素結(jié)合E2F抗體 規(guī)格: 0.2ml
γ-Catenin γ-連環(huán)素/連接蛋白γ抗體 規(guī)格: 0.2mlIGFR3/CD16 FC段γ受體3/免疫球蛋白G Fc段受體III抗體 規(guī)格: 0.1ml
Salmonella enteritidis/SE 腸沙門氏菌抗體 0.2mlTHRA1+2 甲狀激素受體α1+α2抗體 規(guī)格: 0.2ml
注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數(shù)值在什么范圍?
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通常可以使測定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)。