目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測試劑盒>>輔酶Ⅰ系列>> 甲醛脫氫酶(FDH)測試盒微量法
貨號 | BK-01S6345 |
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商品介紹:
測定意義: 甲醛是一種能與蛋白質(zhì)、核酸和脂類產(chǎn)生非特異性反應(yīng)的活潑化合物,對所有生物都具有很高毒性。甲醛脫氫酶作為含鋅中等鏈醇脫氫酶(ADH)的家庭成員之一,廣泛存在于原核和真核生物中,該酶能利用NAD+作為輔酶,將有毒的甲醛氧化,是甲醛氧化途徑中的關(guān)鍵酶。 測定原理 甲醛脫氫酶催化甲醛和NAD+產(chǎn)生NADH,在340nm處的吸光值會增加,測定340nm處的吸光值變化,可計算得到甲醛脫氫酶的活性。 自備實驗用品及儀器 天平、離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96孔板、蒸餾水。 |
提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
甲醛脫氫酶(FDH)測試盒微量法 | 100管/96樣 | 微量法 | BK-01S6345 |
實驗結(jié)果判斷我有妙招:
1、定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:
① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。
② 與水蒸氣,水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封,并遠(yuǎn)離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑,應(yīng)將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存,其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng),所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風(fēng)處保存。
操作步驟:
1. 樣品的準(zhǔn)備:
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集細(xì)胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋,即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進(jìn)行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
3%氯化鈉堿性蛋白胨水 3%Sodium Chloride Peptone Water 9ml*20支/包
50mg D- 氨基酸氧化 D-Amino Acid Oxidase 4℃保存
250mL RNase-Free SSPE(無RNase的SSPE),20X,pH7.4 RNase-Free SSPE,20X,pH7.4 常溫保存
1 管 JM1腸桿菌 JM110 E.coli Strain -80℃保存
2 ug pRNA-H1.1/Adeno pRNA-H1.1/Adeno 低溫運輸,-20℃保存
100mL 動物RNAout (TRIzol) Animal RNAOUT(TRIzol) 4℃保存
2 ug pcDNA3.1/Zeo(+) pcDNA3.1/Zeo(+) 低溫運輸,-20℃保存
100次 動物種屬鑒定PCR Mix 2(16S rDNA) Animal DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存
5g 甲基橙 Methyl Orange 室溫干燥保存
50T 牛海綿狀腦病毒PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
12x50nm Cyanine 3-NHS Ester Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
甲醛脫氫酶(FDH)測試盒微量法EBNA1/EBV Nuclear Antigen EB毒核抗原1抗體 規(guī)格: 0.2ml
TPD54/TPD52L2 瘤蛋白D54蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
PDGF AB+BB 小板源性生因子AB+BB抗體 規(guī)格: 0.2ml
TRIM17/RNF16 環(huán)指蛋白16抗體 規(guī)格: 0.2mlGlutaminase 谷抗體 0.2ml
PTEN/MMAC1(NT) 一種瘤抑制基因抗體(N端) 規(guī)格: 0.1mlTubulin-beta 微管蛋白抗體(免疫組化用抗體)Tubulinβ 規(guī)格: 0.1ml
M2-PK (pyruvate Kinase M2) 丙酮酸激-M2 規(guī)格: 0.1mlCDX2/3 尾側(cè)型同源轉(zhuǎn)錄因子2/3抗體 規(guī)格: 0.2ml
KLHL22 Kelch樣蛋白22抗體 規(guī)格: 0.2mlKLK2 激肽釋放2抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-TCF3/E2A/E47(Ser39) 磷酸化轉(zhuǎn)錄因子3抗體 0.1mlCXCL16 CXC趨化因子16抗體 規(guī)格: 0.1ml
Cecropin monoclonal 殺菌肽/天蠶抗菌肽單克隆抗體 規(guī)格: 1mlABH8/ALKBH8 AlkB同源蛋白8抗體 規(guī)格: 0.2ml
LIPK 脂肪家庭成員K抗體 規(guī)格: 0.2mlPerilipin A 脂滴包被蛋白Perilipin-A抗體 規(guī)格: 0.1ml
TLR11 Toll樣受體11抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-GRB10 (Tyr67) 磷酸化生因子受體結(jié)合蛋白10抗體 規(guī)格: 0.1ml
Sigma1R 衰老相關(guān)基因8蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlDonkey Anti-human IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的驢抗人IgG 規(guī)格: 0.5ml
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)