目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測試劑盒>>輔酶Ⅰ系列>> 甲醛脫氫酶(FDH)測試盒紫外分光光度法
貨號 | BK-01S6346 |
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實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱:甲醛脫氫酶(FDH)測試盒紫外分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
檢測方法:紫外分光光度法
產(chǎn)品貨號:BK-01S6346
產(chǎn)品分類:輔酶Ⅰ系列
商品介紹:
測定意義: 甲醛是一種能與蛋白質(zhì)、核酸和脂類產(chǎn)生非特異性反應(yīng)的活潑化合物,對所有生物都具有很高毒性。甲醛脫氫酶作為含鋅中等鏈醇脫氫酶(ADH)的家庭成員之一,廣泛存在于原核和真核生物中,該酶能利用NAD+作為輔酶,將有毒的甲醛氧化,是甲醛氧化途徑中的關(guān)鍵酶。 測定原理 甲醛脫氫酶催化甲醛和NAD+產(chǎn)生NADH,在340nm處的吸光值會增加,測定340nm處的吸光值變化,可計(jì)算得到甲醛脫氫酶的活性。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 天平、離心機(jī)、分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。 |
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數(shù)值在什么范圍?
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通??梢允箿y定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
500mL Blotto in TBS Blotto in TBS 常溫保存
1g 分子生物學(xué)級糖原干粉 Glycogen Powder 常溫
2 ug pGL4.30[Luc2P/NFAT-RE/Hygro] pGL4.30[Luc2P/NFAT-RE/Hygro] 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
煌綠瓊脂培養(yǎng)基 Brilliant Green Agar Medium 250g
1瓶 HCCLM3細(xì)胞株 HCCLM3 低溫運(yùn)輸和保存
10次 百萬堿基級真菌DNAout
500U Tth 核酸內(nèi)切 IV Tth Endonuclease IV -20℃保存
250mL RIPA Buffer—2 RIPA Buffer—2 常溫保存
1 管 DH10B大腸桿菌 DH10B E.coli Strain -80℃保存
2 ug pREV pREV 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
O157菌成套生化鑒定管 11種*1套/盒*10盒
甲醛脫氫酶(FDH)測試盒紫外分光光度法FMDV Polyprotein (3A protein) 口蹄疫毒A型抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-MAPK14(Tyr323) 磷酸化p38MAPK抗體 規(guī)格: 0.1ml
TET1/CXXC6 Ten-eleven轉(zhuǎn)運(yùn)基因1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlNRP1/CD304 神經(jīng)纖毛蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
MIP4/CCL18 巨噬細(xì)胞癥蛋白18抗體 規(guī)格: 0.1mlDNase gamma 脫氧核糖核酸γ抗體 規(guī)格: 0.2ml
MRF/C11orf9 髓鞘基因調(diào)控因子抗體 規(guī)格: 0.2mlMYBBP1A/p53 activated protein 2 p53激活蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-Mouse IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-Avidin 兔抗親和素 規(guī)格: 1mg
PGF2 α 前列素F2a抗體 規(guī)格: 0.2mlalpha 2 Macroglobulin α2巨球蛋白(α-2M)抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-KLF5(Ser275) 磷酸化KLF5抗體 規(guī)格: 0.1mlMouse Anti-Bov IgG/PE PE標(biāo)記的小鼠抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml
SFR19 剪接因子,/絲豐富19 規(guī)格: 0.2mlPhospho-SATB1 (Ser47) 磷酸化核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
APOC2 載脂蛋白C2抗體 規(guī)格: 0.1mlAPEX2 嘌呤嘧啶核酸內(nèi)切2抗體 規(guī)格: 0.1ml
MAP3K2/MEKK2 絲裂原活化蛋白激激2抗體 規(guī)格: 0.1mlDonkey Anti-human IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的驢抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-mouse IgG-Fc/Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-Fc 規(guī)格: 0.1mlCDC3/CDC10/Septin 7 細(xì)胞周期調(diào)控因子3抗體 規(guī)格: 0.2ml
CD1A T淋巴細(xì)胞CD1A抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-HER3 (Tyr1197) 磷酸化HER3受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)