目錄:上海帛科生物技術有限公司>>生化檢測試劑盒>>輔酶Ⅰ系列>> 乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒微量法
貨號 | BK-01S6347 |
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實驗結果判斷我有妙招:
1、定量測定結果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:
① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風、遠離火源處保存。
② 與水蒸氣,水發(fā)生反應的物質要密封,并遠離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑,應將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存,其相應的溶液較固體更易反應,所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風處保存。
本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數(shù)據(jù)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒微量法 | 100管/96樣 | 微量法 | BK-01S6347 |
商品介紹:
測定意義: 乙醛脫氫酶 (EC 1.2.1.10)是醛脫氫酶的一種,廣泛存在于各種動物、植物和微生物體內(nèi)。主要作用是將乙醛氧化成乙酸,在酒精代謝中起主要作用。在人類和許多動物體內(nèi),線粒體乙醛脫氫酶能把對生物體有害的醇類轉化,所以在細胞解毒研究中乙醛脫氫酶受到高度關注;同時,乙醛脫氫酶在分子生物學以及相關疾病的檢測方面有較廣泛的研究應用。 測定原理 在輔酶Ⅰ存在的條件下,乙醛脫氫酶催化乙醛和NAD+轉化為乙酸和NADH,在340nm處的吸光值會增加,測定340nm處的吸光值變化,可計算得到乙醛脫氫酶的活性。 自備實驗用品及儀器 天平、離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。 |
試劑組成和配制:
提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
操作步驟:
1. 樣品的準備:
a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。
b. 反應啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
2 ug pcDNA3.1(+)/GFP Hsp70 pcDNA3.1(+)/GFP Hsp70 低溫運輸,-20℃保存
馬鈴薯葡萄糖瓊脂(含) Potato Dextrose Agar(Chloramphenicol) 250
50g D- D-Pantothenic Acid Hemicalcium Salt 4℃避光保存
氣單胞菌培養(yǎng)基基礎 Aeromonas Medium Base(Ryan) 250g
5mL 支氣道上皮細胞生長因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存
100mL Bicine Buffer,0.5M,pH9.0 Bicine Buffer,0.5M,pH9.0 常溫保存
50次 DNA電泳分子量標準(φX174 DNA/Hinc Ⅱ) DNAMETER(3) 4℃保存
2 ug pGEX-4T-1-DsRed2 pGEX-4T-1-DsRed2 低溫運輸,-20℃保存
豬支原體培養(yǎng)基 Pig Mycoplasma Base 250g
1瓶 GLC-82 [GLC82]細胞株 GLC-82 [GLC82] 低溫運輸和保存
Bolton肉湯添加劑 Bolton Broth Supplement 1ml/支*5
乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒微量法Goat Anti-Chicken IgG/APC APC標記的羊抗雞IgG 規(guī)格: 0.1ml
CHPT1 甘油二酯磷酸轉移抗體 規(guī)格: 0.2ml
FLAG Tag (CT) FLAG Tag標簽抗體(C端) 規(guī)格: 0.1ml
RBR2/Rb2 p130 視網(wǎng)膜母細胞瘤樣蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
IGF I 胰島素樣生因子1抗體 0.1ml
MARCH9 膜相關環(huán)指蛋白9抗體 規(guī)格: 0.2ml
APOL6 載脂蛋白樣蛋白6抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-GATA1(ser142) 磷酸化珠蛋白轉錄因子1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Layilin 透明質酸受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
VRK1 牛痘毒相關激1抗體(絲/蘇蛋白激VRK1) 規(guī)格: 0.2ml
SULT1A1 芳基磺基轉移1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Dynamin 2 動力蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml