目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測試劑盒>>輔酶Ⅰ系列>> 乳酸脫氫酶（LDH）測試盒可見分光光度法
| 貨號 | BK-01S6326 |
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特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱：乳酸脫氫酶（LDH）測試盒可見分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣
檢測方法：可見分光光度法
產(chǎn)品貨號：BK-01S6326
產(chǎn)品分類：輔酶Ⅰ系列
商品介紹：
測定意義 測定意義: LDH（EC 1.1.1.27）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng)，伴隨著NAD+/NADH之間互變。 測定原理： LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在堿性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。 需自備的儀器和用品： 可見分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些?？梢匀?.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
10次 百萬堿基級植物DNAout 常溫
2 ug P36-Luc P36-Luc 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
TPY肉湯 TPY Broth 250g
100mL 吐溫 -20 Tween-20 室溫密封保存
D-發(fā)酵管（枯草芽孢桿菌） 20支
100 T ROS活性氧檢測試劑盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
25mL LDS-Sample Buffer (non-reducing,4X) LDS-Sample Buffer (non-reducing,4X) 常溫保存
30次 單孢子全基因組擴(kuò)增試劑盒 Single Spore WGA Kit -20℃保存
2 ug pLVX-AcGFP1-N1 pLVX-AcGFP1-N1 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
淀粉水解培養(yǎng)基 The Hydrolysis of Starch Medium 250g
1瓶 OS-RC-2細(xì)胞株 OS-RC-2 低溫運(yùn)輸和保存
乳酸脫氫酶（LDH）測試盒可見分光光度法Rabbit Anti-Bov IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的兔抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml
SPATA12 睪特異表達(dá)新基因5抗體 規(guī)格: 0.1ml
CREG1 E1A激活基因刺激蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
ZNF420 鋅指蛋白420抗體 規(guī)格: 0.2ml
Donkey Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的驢抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml
CDKN3 細(xì)胞周期蛋白依賴性激抑制蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml
FAM83F FAM83F蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Mouse Anti-human IgG 小鼠抗人IgG 規(guī)格: 1mg
ADAM23 去整合素樣金屬蛋白23抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit anti-MG IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記的兔抗爪沙鼠IgG 規(guī)格: 0.3ml
phospho-LLGL1 + LLGL2(Ser650+Ser654) 磷酸化相似瘤抑制基因HUGL抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-EGFR (Tyr1016) 磷酸化表皮生因子受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
注意事項(xiàng)：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數(shù)值在什么范圍？
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時間不夠，可以延長反應(yīng)時間（反應(yīng)時間30min可以延長到40min）。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通?？梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
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