目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>基因檢測PCR試劑盒>>RNA/DNA提取試劑盒>> 第三代免核酸提取病毒采運試劑盒
PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?/span>4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。產(chǎn)品僅用于科研
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱:第三代免核酸提取病毒采運試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格: 詳見說明
產(chǎn)品貨號:BK-P96690
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴(kuò)增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進(jìn)行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
產(chǎn)品特點:
1. 使用化學(xué)修飾的熱啟動聚合酶,反應(yīng)特異性高,*程度地避免了非特異擴(kuò)增;
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化,反應(yīng)靈敏快速,40個循環(huán)只需20多分鐘;
3. 抗干擾能力強(qiáng),反應(yīng)重復(fù)性高,適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進(jìn)行檢測分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
特異性熒光標(biāo)記:
TaqMan法
TaqMan探針的特性:
(1)5′端標(biāo)記有報告基團(tuán)(Reporter, R),如FAM、VIC等
(2)3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán) (Quencher, Q)
(3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團(tuán)吸收 ,無熒光, R與Q分開,發(fā)熒光
(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針
相對定量通過內(nèi)標(biāo)定量:
內(nèi)標(biāo)(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在細(xì)胞中的表達(dá)量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定,受環(huán)境因素影響小,內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括絕對定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的絕對定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
GENEPAGEPLUS5.5%8MUREA*CLDPAK5.5% GENE-PAGE PLUS, 8 M 尿素生物技術(shù)級100MLCOLD 小鼠α-內(nèi)啡肽(αEP)ELISA試劑盒 ,英文名: αEP ELISA Kit
猿猴病毒40大腫瘤抗原氨基段肽段Simian Virus 40 Large Tumor Antigen Amino-Terminal Peptide質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR ratNoradrenaline,NAELISAKit大鼠去甲(NA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 人多形核白細(xì)胞彈性蛋白酶(PMN Elastase)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
生長抑制素-28Somatostatin-28質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR F.solaniRFLP基因分析試劑盒20 小鼠p53(p53)試劑盒 Mouse p53/tumor protein,p53/TP53 ELISA Kit
物質(zhì)P(1-7)Substance P (1-7)質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR Mouserudimealbovineserumalbumincheck-upELISA試劑盒小鼠的牛血清白蛋白殘留檢測ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 五聚素3(PTX3)ELISA試劑盒 ,英文名: PTX3 ELISA Kit
SB 203580SB203580質(zhì)量規(guī)格:>98%,p38 MAPK抑制劑 小鼠粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA試劑盒 ,英文名: G-CSF ELISA Kit Mousemyeloperoxidase,MPOELISA試劑盒小鼠髓過氧化物酶(MPO)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
透明質(zhì)酸,玻尿酸,醣醛酸(分子量4K)Hyaluronic Acid 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR,M.W:4000 大量全血基因組DNA化試劑盒(20毫升全血)10 傳染性胃腸炎病毒(PTGV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
特比萘芬-d7鹽酸鹽Terbinafine-d7 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口 RatIerleukin8,IL-8ELISA試劑盒大鼠白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T HumanPhosphorylatedacetylCoA,PaCoAELISA試劑盒人1酸化乙酰輔酶A(PaCoA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
羥基特比萘芬Hydroxy Terbinafine質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口 小鼠胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISA試劑盒 ,英文名: IGF-2 ELISA Kit ELISAKitIL-17豬白介素17規(guī)格:48T/96T
第三代免核酸提取病毒采運試劑盒羥基特比萘芬β-D-葡萄糖苷酸Hydroxy Terbinafine β-D-Glucuronide質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口 小鼠抗單核細(xì)胞抗體(AMA)ELISA檢測試劑盒Mouseai-Monocyteaibody,AMAELISAKit 96T/48T HumancytosolicphospholipaseA2,cPLA2ELISAKit人胞漿型1脂酶A2(cPLA2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
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