目錄:上海帛科生物技術有限公司>>基因檢測PCR試劑盒>>RNA/DNA提取試劑盒>> PCR級MgSO4溶液
PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?/span>4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。產(chǎn)品僅用于科研
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱:PCR級MgSO4溶液
產(chǎn)品規(guī)格: 詳見說明
產(chǎn)品貨號:BK-P96830
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
產(chǎn)品特點:
1. 使用化學修飾的熱啟動聚合酶,反應特異性高,*程度地避免了非特異擴增;
2. 反應緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化,反應靈敏快速,40個循環(huán)只需20多分鐘;
3. 抗干擾能力強,反應重復性高,適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復雜樣本中的靶基因進行檢測分析。
在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
特異性熒光標記:
TaqMan法
TaqMan探針的特性:
(1)5′端標記有報告基團(Reporter, R),如FAM、VIC等
(2)3′端標記有熒光淬滅基團 (Quencher, Q)
(3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團吸收 ,無熒光, R與Q分開,發(fā)熒光
(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針
相對定量通過內標定量:
內標(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在細胞中的表達量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定,受環(huán)境因素影響小,內標定量結果代表了樣本中所含細胞或基因組數(shù)量。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括絕對定量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的絕對定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術:引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
尿酸,英文名或英文縮寫:Tricyanic acid,級別:AR,98%,規(guī)格:25克 人P2蛋白抗體(IgG)免疫試劑盒 Human myelin protein two aibody IgG ELISA Kit
胰島素(牛)質量規(guī)格:BR,27U/mg,進分INSULIN ELISAKitPAP人前列腺酸性1酸酶規(guī)格:48T/96T 大鼠白介素1β(IL-1β)試劑盒 Rat Ierleukin 1β,IL-1β ELISA Kit
L-天門冬氨酸鉀質量規(guī)格:>99%,BRL-Aspartate Potassium 小鼠γ突觸核蛋白(SNCG)ELISA試劑盒 ,英文名: SNCG ELISA Kit CLIAKitfoCCC5b-9(MouseterminalcomplemecomplexC5b-9)ELISAKit小鼠末端補體復合物C5b-9規(guī)格:48T/96T
輔酶Q10,泛醌質量規(guī)格:>98%,BRCoenzyme Q10,Ubiquinone 大鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA檢測試劑盒RatTumornecrosisfactorsolublereceptorⅠ,TNFsR-ⅠELISAKIT 96T/48T 人體HLA-DPB1RFLP基因分析試劑盒20
輔酶Q10(標準品)質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品Coenzyme Q10 人Rho GDP解離抑制因子1(ARHGDIA/GDIA1)試劑盒 Human ARHGDIA/GDIA1 ELISA kit ELISAKitTTN人抗肌聯(lián)蛋白抗體規(guī)格:48T/96T
蘇拉明鈉質量規(guī)格:>98%,BRSuramin 人表面活性蛋白A(SP-A)ELISA檢測試劑盒HumanSurfactaProteinA,SP-AELISAKit 96T/48T HumanFreeThyroxine,FT4ELISA試劑盒人游離甲狀腺素(FT4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
彈性蛋白酶質量規(guī)格:30 units/mgElastase, pancreatic from porcine pancreas 大鼠顆粒酶A(Gzms-A)試劑盒 Rat granzymes A,Gzms-A ELISA Kit HumanierferoegulatoryFactor,IRFELISAKit人干擾素調節(jié)因子(IRF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
脂肪酶質量規(guī)格:20000U/g,BRLipase 英文名稱RatCRHELISAKit大鼠促腎上皮質激素釋放激素(CRH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 鵝促卵泡素(FSH)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
木聚糖酶質量規(guī)格:BR,6萬U/GXylanase from Trichoderma viride 活力伊紅(eosin-nigrosin)染色試劑盒50 人血吸蟲抗原試劑盒 Human schistosoma ELISA Kit
PCR級MgSO4溶液LX-2, 人肝星形細胞株氮酮5克
人臍靜脈平滑肌細胞2,2-雙(溴基)-1,3-炳二醇 2,2-Bis(bromomqthyl)propcnq-1,3-diol 396-90-0
人臍靜脈內皮細胞;HUV-EC-C 人甲狀腺濾泡上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL棕櫚油酸
人胚肺成纖維細胞;IMR-90HalfFraser添加劑1米
COLEC12 Others Rat 大鼠 CLP1 / COLEC12 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 3,4-二扶本胺3,4-Difluoroaniline