在分子生物學(xué)作為基因工程的上游技術(shù),其實(shí)驗(yàn)的成果和準(zhǔn)確性將決定下游所有的步驟和zui終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。所以構(gòu)建一個(gè)完備的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室是非常重要的,以下就讓我們博翎公司的工程師來(lái)說(shuō)說(shuō)構(gòu)建一個(gè)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的組成和技術(shù)要求。
1. 冰箱: 根據(jù)藥品、試劑及多種生物制劑保存的需要,必須具備不同控溫級(jí)別的冰箱。zui常使用的有:4℃、-20℃、-80℃冰箱。4℃適合儲(chǔ)存某些溶液、試劑、藥品等。-20℃適用于某些試劑、藥品、酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白質(zhì)樣品等。-80℃適合某些長(zhǎng)期低溫保存的樣品、大腸桿菌菌種、純化的樣品、特殊的低溫處理消化液等的保存。0-10℃的層析冷柜適合低溫條件下的電泳、層析、透析等實(shí)驗(yàn)。
2. 培養(yǎng)箱:37℃恒溫箱用于細(xì)菌的平板培養(yǎng)及分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
3. 恒溫培養(yǎng)搖床:用于大腸桿菌等生物工程菌種的擴(kuò)增。
4. 水浴鍋:用于保溫并進(jìn)行各類實(shí)驗(yàn)。 25-100℃水浴搖床可用于分子雜交試驗(yàn),各種生物化學(xué)酶反應(yīng)等試驗(yàn)的保溫。 含低溫的水浴槽可以用于分子生物學(xué)的質(zhì)粒與基因片段的連接等實(shí)驗(yàn)及用于42度的大腸桿菌感受態(tài)的熱激。
5. 烘箱:主用于烘干實(shí)驗(yàn)器皿,有些需要溫度高些,有些需要溫度低些。用于RNA方面的實(shí)驗(yàn)用具, 需要在250℃烤箱中烘干,有些塑料用具只能在42-45℃的烤箱中進(jìn)行烘干。
6. 超純水機(jī):隨著分子生物學(xué)的飛速發(fā)展,許多實(shí)驗(yàn)對(duì)水純度的要求越來(lái)越高,用自來(lái)水、蒸餾水、離子交換水、反滲透純水做為供水,磁鐵耦合齒輪泵作用使水循環(huán)。用于PCR、PCR氨基酸分析、DNA測(cè)序、酶反應(yīng)、組織和細(xì)胞培養(yǎng)等。
7. 蒸汽消毒鍋:分子生物學(xué)所用大部分試劑,而且實(shí)驗(yàn)用具都應(yīng)嚴(yán)格消毒滅菌。用于小批量物品的隨時(shí)消毒。大批實(shí)驗(yàn)物品、試劑、培養(yǎng)基可使用大型消毒且定時(shí)進(jìn)行消毒。
8. 濾器濾膜:不耐高溫、高壓的試劑用其處菌。
9.各種天平:臺(tái)秤、精密電子分析天平,用于稱量各類試劑。
10.液體體積的度量:量筒、移液管、微量取液器、刻度試管、燒杯、錐形瓶等。
11.pH計(jì):測(cè)定溶液中H+的直接電位的儀器,主要通過(guò)一對(duì)電極,在不同的pH溶液中產(chǎn)生不同的電動(dòng)勢(shì)用pH值表示出來(lái);pH試紙:只適用于培養(yǎng)液、酚飽和液、緩沖液或其它試劑溶液的pH值的粗略估計(jì)。而大部分試劑的配制要求嚴(yán)格的pH值,需度高(小數(shù)點(diǎn)后兩位)的pH計(jì)。
12. 分光光度計(jì):光密度、分光光度計(jì)是利用物質(zhì)在可見(jiàn)光和紫外線區(qū)域中的吸收光譜來(lái)鑒定該物質(zhì)的性質(zhì)及其含量的一種儀器。它是由光源、單色器、吸收池、接收器、測(cè)量?jī)x表或顯示屏幕所組成。OD值是許多溶液中溶質(zhì)定量的方便指標(biāo)之一,通過(guò)所產(chǎn)生的單色光而測(cè)定某一溶液對(duì)該單色光的吸收值,利用它可進(jìn)行核酸溶液定量和純度的初步判斷。OD值也可以作為菌濃的檢測(cè)指標(biāo)。
13. 高速離心機(jī):zui大轉(zhuǎn)速25000 r/m ,zui大離心力89000g。有冷凍和常溫兩種,多用于制備和手收集微生物、細(xì)胞碎片、細(xì)胞、大的細(xì)胞器、硫酸銨沉淀物以及免疫沉淀物等。
14.超凈工作臺(tái):內(nèi)有紫外燈、照明燈、還應(yīng)有酒精燈火焰、75%乙醇等滅菌的設(shè)備,是一種提供局部潔凈度的設(shè)備。其原理是鼓風(fēng)機(jī)驅(qū)動(dòng)空氣,經(jīng)過(guò)低、中效的過(guò)濾器后,通過(guò)工作臺(tái)面,使實(shí)驗(yàn)操作區(qū)域成為無(wú)菌的環(huán)境。
15.電泳系統(tǒng):電泳技術(shù)是檢測(cè)、鑒定各種生物大分子的純度、含量及描述它們的特征,甚至還是分離、純化、回收和濃縮樣品的工具之一。 電泳系統(tǒng)分為電源和電泳槽,電源需經(jīng)穩(wěn)流通過(guò)穩(wěn)壓器,既能提供穩(wěn)定的直流電,又能輸出穩(wěn)定的電壓;水平式電泳槽:一般分為微型電泳槽和大號(hào)水平式電泳槽
16.PCR儀:Polymerase Chain Reaction儀,也稱DNA熱循環(huán)儀,基因擴(kuò)增儀,它是使一對(duì)寡核苷酸引物結(jié)合到正負(fù)DNA鏈上的靶序列兩側(cè),從而酶促合成拷貝數(shù)百萬(wàn)倍的靶序列DNA片段,它的每一循環(huán)包括在三種不同溫度進(jìn)行的DNA變性,引物復(fù)性,DNA聚合酶催化的延伸反應(yīng)三個(gè)過(guò)程。需要說(shuō)明的是,有些實(shí)驗(yàn)室可能還需要梯度PCR儀或?qū)嵤露繜晒釶CR儀來(lái)進(jìn)行一些特殊的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
17.凝膠成像分析系統(tǒng):不用紫外和EB、操作安全、直接讀取數(shù)據(jù)。
18.其他設(shè)備
1. 微波爐:便于一些溶液的快速加熱和定溫加熱,電泳瓊脂糖凝膠配制、溶化等。
2. 制冰機(jī):用于制造大多數(shù)核酸、蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)操作所需的低溫環(huán)境,以減少核酸酶或蛋白質(zhì)酶的水解。
3. 層析裝置:(色譜分離)是一種分離多組分混合物的有效物理方法。
真空印記系統(tǒng),DNA合成/測(cè)序儀:這些都是對(duì)核酸進(jìn)行深入研究的*儀器。
4. 磁力攪拌器:多角度旋轉(zhuǎn)混勻器、快速振蕩混合器:用于混合儀器。
5. 組織勻漿器:超聲組織及細(xì)胞破碎器,用其進(jìn)行樣品的分離提純實(shí)驗(yàn)。
6. 通風(fēng)櫥:很多溶劑能逸出毒氣,*柜 ,放射性試驗(yàn)還要有有機(jī)玻璃屏蔽。
7. 玻璃蒸餾器、電熱加帽、變壓器:用于酚等有機(jī)溶劑的蒸餾。
8. Tip頭、Eppendorf管: 微管移液器tip頭(吸液尖)、Eppendorf管(微量離心管)可洗滌,硅化消毒后反復(fù)使用。對(duì)一些要求嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn),如RNA的提取、保存等操作,應(yīng)使用新的消毒tip頭與Eppendorf管。另外還應(yīng)備有常用規(guī)格的離心管(1000ml、500 ml、250 ml、50 ml、7 ml等)及96孔、24孔、12孔、6孔的細(xì)胞培養(yǎng)塑料平板等。
9. 小型設(shè)備、用具: 定時(shí)器、濾膜、保鮮膜、防護(hù)眼鏡鴨嘴鑷;常規(guī)的玻璃或塑料器皿,包括平皿、試管、燒杯、量瓶、試劑分液漏斗、避光保存的試劑應(yīng)使用棕色試劑瓶,如飽和酚、巰基乙醇等;記號(hào)筆、各種手套(PE、乳膠、家用、防酸的等)。