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Amplite 發(fā)光法過氧化酶檢測(cè)試劑盒 是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于過氧化物酶的試劑盒，過氧化酶是常用于與抗體按4:1比例結(jié)合的小分子(MW ~40 KD)。由于分子量小，因此在與抗體、抗原結(jié)合形成復(fù)合物時(shí)不會(huì)帶來空間阻礙。與其它酶標(biāo)簽相比過氧化酶更便宜。主要它的主要缺點(diǎn)是在保護(hù)劑（例如）存在的條件下溶解性低，在低濃度下，過氧化酶的活性低。HRP偶聯(lián)物是廣泛用作ELISA（酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)）、免疫組化技術(shù)、Northern、 Southern和Western blot分析的第二個(gè)檢測(cè)試劑。Amplite生物發(fā)光法過氧化酶檢測(cè)試劑盒提供了一種快速(10分鐘)HRP一步法均衡的、無需洗脫的分析方案。本試劑盒可以用于ELISAs，酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)分析，氧化酶抑制劑高通量篩選等。試劑盒經(jīng)過化處理，并且可用于高通量液體處理設(shè)備。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的Amplite 發(fā)光法過氧化酶檢測(cè)試劑盒 。

實(shí)驗(yàn)方案

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1.準(zhǔn)備HRP工作溶液（50μL）
2.添加HRP標(biāo)準(zhǔn)品和/或測(cè)試樣品（50μL）
3.在室溫下孵育10-30分鐘
4.監(jiān)測(cè)664±5 nm的吸光度

溶液制備

1.儲(chǔ)備溶液

所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1. Amplite 紅色過氧化物酶底物儲(chǔ)備液（100X）：
將250μLDMSO（組分E）加入到Amplite 紅色過氧化物酶底物（組分A）的小瓶中以制備100X Amplite 紅色過氧化物酶底物儲(chǔ)備溶液。應(yīng)立即使用原液，避光。

2. HRP標(biāo)準(zhǔn)溶液（20 U / mL）：
將1mL測(cè)定緩沖液（組分C）加入到辣根過氧化物酶（組分D）的小瓶中以制備20U / mL的HRP標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3. H2O2儲(chǔ)備溶液（20 mM）：
將22.7μL的3％H2O2（0.88M，組分B）加入977μL的測(cè)定緩沖液（組分C）中以制備20mM H2O2儲(chǔ)備溶液。注意：稀釋的H2O2溶液不穩(wěn)定。應(yīng)丟棄未使用的部分。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液

HRP標(biāo)準(zhǔn)
在1999μL分析緩沖液（組分C）中加入1μL的20U / mL HRP標(biāo)準(zhǔn)溶液，得到10mU / mL HRP標(biāo)準(zhǔn)溶液（SD7）。取10 mU / mL HRP標(biāo)準(zhǔn)溶液（SD7）并進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，得到連續(xù)稀釋的HRP標(biāo)準(zhǔn)品（SD6-SD1）和分析緩沖液（組分C）。

3.工作溶液

將50μL的100X Amplite 紅色過氧化物酶底物儲(chǔ)備溶液和50μL的20mM H2O2儲(chǔ)備溶液加入到4.9mL的測(cè)定緩沖液（組分C）中以制備HRP工作溶液，避光。