Thiolite  Green硫醇化合物綠色熒光探針是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的熒光探針，Thiolite Green是用于測量硫醇化合物的靈敏的熒光探針之一。與硫醇化合物（例如半胱*酸）反應(yīng)時，會生成綠色熒光加合物。它可用于定量蛋白質(zhì)上的半胱*酸數(shù)量。我們用它來熒光測量谷胱*肽。與含硫醇的化合物反應(yīng)后，其熒光增強(qiáng)> 200倍。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Thiolite  Green硫醇化合物綠色熒光探針。

操作步驟

1.準(zhǔn)備Thiolite Green 工作溶液：

1.1在高品質(zhì)無水DMSO中準(zhǔn)備10至25 mM的Thiolite Green 儲備溶液。儲備溶液應(yīng)及時使用；任何剩余的溶液均需等分并冷凍在-20℃。

注意：未使用的Thiolite Green儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在-20oC下避光保存。

1.2準(zhǔn)備一個2X Thiolite 綠色 工作溶液：在實(shí)驗(yàn)的當(dāng)天，要么溶解Thiolite 綠色 在DMSO或解凍的等分試樣Thiolite 綠色 原液至室溫。在pH值為20的20 mM Hepes緩沖液或您選擇的緩沖液中，制備終濃度為100至250 µM的2X工作溶液，建議使用終濃度為50至100 µM的Thiolite Green 來測量硫醇溶液濃度。

2.在上清液中進(jìn)行GSH分析：

2.1向GSH 標(biāo)準(zhǔn)品，空白對照和測試樣品的每個孔中加入50 µL 2X Thiolite Green 工作溶液（來自步驟1.2），使GSH 測定總體積為100 µL /孔。

注意：對于384孔板，將25 µL樣品和25 µL GSH反應(yīng)混合物加到每個孔中。

2.2在避光的條件下，將反應(yīng)在室溫下孵育10至60分鐘。

2.3用熒光板讀數(shù)器在Ex / Em = 490/525 nm處監(jiān)測熒光的增加。

2.4使用空白孔（僅使用測定緩沖液）中的熒光作為對照，并通過硫醇反應(yīng)從這些孔的值中減去。