胱天蛋白酶Caspase 8熒光底物Ac-IETD-AFC 綠是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的熒光底物，Ac-IETD-AFC是含有乙酰基（Ac）部分的熒光半胱天冬酶-8 /顆粒酶B底物。 該底物被半胱天冬酶8水解，產(chǎn)生高度熒光的7-酰氨基-4-三氟甲基香*素（AFC）。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的胱天蛋白酶Caspase 8熒光底物Ac-IETD-AFC 綠。

操作方法

以下協(xié)議僅提供指導(dǎo)，應(yīng)根據(jù)您的特定需求進(jìn)行修改。

使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的常規(guī)解決方案胱天蛋白酶測(cè)定

1.在DMSO中準(zhǔn)備10 mM的儲(chǔ)備溶液。

2.如下準(zhǔn)備2X半胱天冬酶底物（50 µM）分析溶液：50 µL底物原液，100 µL DTT（1M），400 µL EDTA（100 mM），10 mL Tris Buffer（20 mM），pH = 7.4。

3.將等體積的半胱天冬酶標(biāo)準(zhǔn)品或樣品與2X半胱天冬酶底物測(cè)定溶液混合，并在室溫下孵育至少1小時(shí)。

4.使用熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測(cè)熒光，或使用酶標(biāo)儀監(jiān)測(cè)吸光度。

使用細(xì)胞滲透性FMK Caspase探針的細(xì)胞Caspase測(cè)定

1.在DMSO中準(zhǔn)備2-5 mM的儲(chǔ)備溶液。

2.根據(jù)需要處理細(xì)胞。

3.通過(guò)用20 mM Hepes緩沖液（HHBS）在Hanks中稀釋DMSO儲(chǔ)備溶液（來(lái)自步驟2.1），制備2X滲透性半胱天冬酶底物（20 µM）分析溶液。

4.將等體積的處理過(guò)的細(xì)胞與2X半胱天冬酶底物測(cè)定溶液混合（來(lái)自步驟2.3），并在37°C，5％CO2的培養(yǎng)箱中孵育細(xì)胞至少1小時(shí)。

5.用HHBS清洗細(xì)胞至少一次。

6.通過(guò)流式細(xì)胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度。

使用細(xì)胞滲透性FMK Caspase探針進(jìn)行細(xì)胞半胱天冬酶測(cè)定（僅適用于＃13470-13476）

1.通過(guò)向小瓶中加入50 µL DMSO制備250X儲(chǔ)備液。

2.根據(jù)需要處理細(xì)胞。

3.以1：250的比例將250 X DMSO儲(chǔ)備溶液添加到細(xì)胞溶液中（例如2 µL至500 µL細(xì)胞），并將細(xì)胞在37°C，5％CO2的培養(yǎng)箱中孵育1小時(shí)。

4.用HHBS清洗細(xì)胞至少一次。

5.通過(guò)流式細(xì)胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度。