樣品實驗方案

簡要概述

1. 用5×105至1×106細胞/ mL的密度制備含測試化合物的細胞

2. 將5 µL 200X MitoLite NIR加入1 mL細胞溶液中

3. 在37°C，5％CO2的培養(yǎng)箱中孵育細胞15-30分鐘

4. 沉淀細胞，并將細胞重懸于1 mL生長培養(yǎng)基中

5. 使用帶有FL4通道的流式細胞儀分析細胞

操作步驟

1.對于每個樣品，在1 mL溫暖的培養(yǎng)基或您選擇的緩沖液中以5×105至1×106細胞/ mL的密度制備細胞。 注意：應單獨評估每種細胞系，以確定誘導凋亡的佳細胞密度。

2.用測試化合物處理細胞一段時間，以誘導細胞凋亡，并建立平行對照實驗。

陰性對照：僅用載體處理細胞。

陽性對照：在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中，以5-50 µM的濃度用FCCP或CCCP處理細胞15至30分鐘。 注意：CCCP或FCCP可以與MitoLite NIR同時添加。 為了獲得佳結果，可能需要為每個單獨的細胞系滴定CCCP或FCCP。

3.向處理過的細胞中加入5 µL 200X MitoLite NIR（組分A）。

4.將細胞在37°C，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育15至30分鐘。 注意：對于貼壁細胞，在用MitoLite NIR染料上樣溶液孵育之前，用0.5 mM EDTA輕輕提起細胞以保持細胞完整，并用含血清的培養(yǎng)基洗滌一次。

5.以1000 rpm離心細胞4分鐘，然后將細胞重懸于1 mL分析緩沖液（組分B）或您選擇的緩沖液中。

6.使用帶有FL4通道的流式細胞儀（Ex / Em = 635/660 nm）檢測熒光強度。