樣品實驗方案

簡要概述

1. 準(zhǔn)備細胞

2. 添加測試化合物

3. 添加MitoTell Red工作溶液（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）

4. 將板在5％CO2、37°C的培養(yǎng)箱中孵育30分鐘

5. 添加測定緩沖液B（50 µL /孔/ 96孔板或12.5 µL /孔/ 384孔板）

6. 在Ex / Em = 610/650 nm（截止= 630 nm）或使用Cy5濾光片的熒光顯微鏡下檢測熒光增加（底部讀取模式）

溶液配制

將50 µL的200X MitoTell Red（組分A）添加到10 mL的測定緩沖液A（組分B）中，并充分混合以制成MitoTell Red工作溶液，避光。

實驗步驟

1.用測試化合物處理細胞一段時間，以誘導(dǎo)細胞凋亡，并建立平行對照實驗。注意：我們用20 µM CCCP處理HeLa細胞15分鐘，以改變線粒體膜電位。CCCP或FCCP可以與MitoTell Red同時添加。為了獲得結(jié)果，可能需要為每個單獨的細胞系滴定CCCP或FCCP。

2.將100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板的MitoTell Red工作溶液加入細胞板。

3.在避光的條件下，將板在37oC下孵育15-30分鐘。注意：適當(dāng)?shù)姆跤龝r間取決于所用的單個細胞類型和細胞濃度。優(yōu)化每個實驗的孵育時間。

4.將50 µL /孔/ 96孔板或12.5 µL /孔/ 384孔板的測定緩沖液B（組分C）添加到細胞板中。注意：加載后請勿洗滌細胞。對于非貼壁細胞，建議在加入測定緩沖液B（組分C）后，以800 rpm離心細胞板2分鐘，然后制動。

5.加入測定緩沖液B（組分C）后10到30分鐘，用熒光酶標(biāo)儀（Ext / Em = 610/650 nm（截止= 630 nm））檢測熒光強度，或在熒光下用帶Cy5濾鏡的顯微鏡觀察熒光信號。