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我們的Cell Meter 細(xì)胞內(nèi)*GSH檢測(cè)試劑盒 是一套用于檢測(cè)細(xì)胞生存力的工具。有多種參數(shù)可用于檢測(cè)細(xì)胞活力。該特定試劑盒旨在通過測(cè)量耗盡的抗氧化劑還原型*（GSH）來檢測(cè)細(xì)胞凋亡。 GSH參與許多細(xì)胞過程，包括清除自由基，藥物解毒，細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和細(xì)胞增殖。細(xì)胞中GSH濃度的降低是許多細(xì)胞類型中對(duì)不同凋亡刺激物響應(yīng)的細(xì)胞死亡進(jìn)程的早期標(biāo)志。我們的Cell Meter 細(xì)胞內(nèi)GSH檢測(cè)試劑盒為所有必需成分提供了優(yōu)化的檢測(cè)方法，用于檢測(cè)GSH降低的細(xì)胞凋亡。該熒光測(cè)定法是基于使用我們專有的非熒光Thiolite Green染料檢測(cè)細(xì)胞中GSH的結(jié)果，該染料與硫醇反應(yīng)后會(huì)發(fā)出強(qiáng)烈的熒光。在正常細(xì)胞中，Thiolite Green主要在細(xì)胞質(zhì)中積累，但在凋亡細(xì)胞中它會(huì)部分轉(zhuǎn)移到線粒體中，而Thiolite Green的染色強(qiáng)度會(huì)降低。 Thiolite Green染色的細(xì)胞可以通過流式細(xì)胞儀觀察。該試劑盒可與其他試劑配對(duì)，例如7-AAD（Cat＃17501），碘化丙啶（Cat＃17517），用于多參數(shù)研究細(xì)胞生存力和凋亡。該試劑盒經(jīng)過優(yōu)化，可通過流式細(xì)胞儀篩選凋亡激活劑和抑制劑。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供的Cell Meter 細(xì)胞內(nèi)*GSH檢測(cè)試劑盒 。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

用5×105至1×106細(xì)胞/ mL的密度制備含測(cè)試化合物的細(xì)胞
將5 µL 200X Thiolite Green加入1 mL細(xì)胞溶液中
將細(xì)胞在37°C，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育15至30分鐘
沉淀細(xì)胞并將細(xì)胞重懸于1 mL生長(zhǎng)培養(yǎng)基中
使用帶有FL1通道的流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞

溶液配制

儲(chǔ)存溶液配制

1. Thiolite 綠色原液（200X）：將500µL DMSO（組分C）加入小瓶Thiolite Green（組分A）中并充分混合，制成200X Thiolite Green儲(chǔ)備液，避光。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.對(duì)于每個(gè)樣品，在1 mL溫?zé)崤囵B(yǎng)基或自備緩沖液中以5×105至1×106細(xì)胞/ mL的密度制備細(xì)胞。注意：應(yīng)單獨(dú)評(píng)估每種細(xì)胞系，以確定誘導(dǎo)凋亡的細(xì)胞密度。

2.用測(cè)試化合物處理細(xì)胞所需的時(shí)間以誘導(dǎo)凋亡。

3.向處理過的細(xì)胞中加入5µL 200X Thiolite Green儲(chǔ)備溶液。

4.將細(xì)胞在37°C，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育15至30分鐘。注意：對(duì)于貼壁細(xì)胞，用0.5 mM EDTA輕輕提起細(xì)胞以保持細(xì)胞完整，并在與Thiolite Green染料上樣溶液孵育之前，用含血清的培養(yǎng)基清洗細(xì)胞一次。合適的孵育時(shí)間取決于所用的單個(gè)細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。優(yōu)化每個(gè)實(shí)驗(yàn)的孵育時(shí)間。

5.可選：將細(xì)胞以1000 rpm離心4分鐘，然后將細(xì)胞重懸于1 mL的測(cè)定緩沖液（組分B）或自備緩沖液中。

6.使用帶有FL1通道的流式細(xì)胞儀（Ex / Em = 490/525 nm）檢測(cè)熒光強(qiáng)度。