操作步驟

該協(xié)議僅提供指南，應(yīng)根據(jù)您的特定需求進行修改。

1.準備2-10 mMDMSO儲備溶液

對于＃22014添加45微升DMSO成50 μ 克小瓶使2mM的儲備溶液（1毫克/毫升，相當于1.8毫摩爾）;

對于＃22015添加36微升DMSO成50 μ 克小瓶制成10mM儲備溶液（1毫克/毫升，相當于1.46毫摩爾）;

對于＃22016，添加153 uL ml DMSO以制成10 mM儲備溶液（1 mg / ml相當于1.53 mM）；

對于＃22017，添加215μLDMSO以制成10 mM儲備溶液（1 mg / ml相當于2.15 mM）;

對于＃22020，將4.2 mg溶于1 ml DMSO中制成10 mM儲備溶液（1 mg / ml相當于?2.4 mM）；

注意：儲備溶液應(yīng)及時使用；應(yīng)將所有剩余的溶液等分并在< -20 o C下冷凍。避免重復(fù)凍融循環(huán)，并避光

2.準備染料工作液

在使用前，通過用Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或您選擇的pH 7緩沖液稀釋步驟1中的DMSO儲備溶液，準備好1至20 µM的染料工作溶液。

3.用流式細胞儀或熒光顯微鏡分析細胞：

3.1用測試化合物處理細胞所需的時間。

3.2離心細胞，每管得到2-10 x105細胞。

3.3將細胞重懸于500 µL 的染料工作溶液中（來自步驟2）。

3.4將細胞與染料溶液在室溫或37° C下避光放置15至30分鐘。

3.5從細胞中除去染料工作溶液，用HHBS或您選擇的緩沖液洗滌細胞。將細胞重懸于500 µL預(yù)熱的HHBS或培養(yǎng)基中，每管可得到2-10 x 10 5個細胞。

3.6用流式細胞儀（FL1通道） 或熒光顯微鏡監(jiān)測Ex / Em = 490/520 nm處的熒光變化。

注意：對于細菌細胞染色：將母液在通過測試細菌過夜生長而預(yù)先調(diào)節(jié)的營養(yǎng)肉湯中以1：800的比例稀釋時，染色是有效的，但是也可以使用新鮮的營養(yǎng)肉湯或PBS。細菌懸浮液應(yīng)用PBS稀釋至105 - 10 7每毫升。將1 ml溶液加到.45 µm過濾器（25mm）上并真空過濾除去溶液，然后加入1ml染料溶液并在室溫下孵育5-10分鐘，即可對細菌染色。