Cell Meter 細胞自噬檢測熒光成像試劑盒 自噬是動物細胞內(nèi)大分子降解的主要途徑之一。 自噬過程涉及將細胞質(zhì)和細胞內(nèi)細胞器隔離在稱為自噬體的膜結(jié)合液泡中，將自噬體與溶酶體融合，然后降解被隔離的物質(zhì)。該試劑盒采用Autophagy Super Blue 作為特異性自噬標記物來分析自噬活性。 該測定法經(jīng)過優(yōu)化，可直接檢測分離和粘附細胞中的自噬。該試劑盒針對熒光顯微鏡進行了優(yōu)化。 它提供了比其他市售自噬探針高的選擇性。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Cell Meter 細胞自噬檢測熒光成像試劑盒。

樣品實驗方案

簡要概述

1.用您的測試化合物以1-2×104個細胞/孔的密度制備細胞
2.添加自噬Super Blue 工作溶液
3.在37°C孵育15-60分鐘
4.用洗滌緩沖液洗滌細胞
5.使用DAPI濾光片組檢測在Ex / Em = 330/520 nm（截止= 475 nm）處的熒光

溶液配制

工作溶液配制

將20μL500X自噬Super Blue （組分A）添加到10 mL染色緩沖液（組分B）中，并充分混合以制成Autophagy Super Blue 工作溶液，避光。 注意：20μL500X自噬Super Blue （組分A）足以容納一個96孔板。

實驗步驟

1.根據(jù)您的特定誘導方案將細胞培養(yǎng)至適合自噬誘導的密度（約1-2×104細胞/孔/ 96孔板）。同時，在每種標記條件下，以與誘導種群相同的密度培養(yǎng)非誘導的陰性對照細胞種群。

2.除去培養(yǎng)基。

3.在每孔中加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的自噬Super Blue 工作溶液。

4.將細胞在37°C，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育15至60分鐘。注意：適當?shù)姆跤龝r間取決于所用的單個細胞類型和細胞濃度。

5.用洗滌緩沖液（組分C）洗滌細胞3-4次，然后向每個孔中添加100 µL洗滌緩沖液（組分C）。注意：建議增加標記濃度或孵育時間，使染料在細胞未充分染色的情況下積累。

6.用熒光酶標儀在Ex / Em = 330/520 nm（Cutoff = 475 nm）上檢測熒光強度，或使用帶有DAPI濾光片組的熒光顯微鏡。

圖示

圖1.通過自噬在HeLa細胞中誘導自噬Super Blue 標記的囊泡。 將HeLa細胞在常規(guī)DMEM培養(yǎng)基（左：對照）中或在含5％血清的1X HBSS緩沖液中（右：自噬處理）孵育16小時。對照細胞和處理過的細胞均在37°C，5％CO2培養(yǎng)箱中與Autophagy Super Blue 工作溶液一起孵育20分鐘，并用洗滌緩沖液洗滌3次。 立即在帶有DAPI通道（藍色）的熒光顯微鏡下對細胞成像。 細胞核用Nuclear Gree LCS1（綠色）染色。