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熒光信號(hào)增強(qiáng)液 FluoroQuest 是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的熒光信號(hào)增強(qiáng)液，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)與熒光有機(jī)染料偶聯(lián)時(shí)，染料分子的熒光發(fā)射通常會(huì)降低，有時(shí)會(huì)降低50-70％。這種猝滅現(xiàn)象已經(jīng)有數(shù)十年的歷史了，但是，目前尚沒(méi)有簡(jiǎn)單，實(shí)用的方法來(lái)控制與蛋白質(zhì)結(jié)合的染料的熒光，特別是對(duì)于與免疫球蛋白結(jié)合的染料的熒光。我們提供此FluoroQuest 熒光信號(hào)增強(qiáng)解決方案，該解決方案在細(xì)胞成像和流量分析中可將熒光強(qiáng)度提高至2.5倍。這種實(shí)驗(yàn)方案提供了一種有效的方法來(lái)提高檢測(cè)免疫學(xué)，組織化學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)中使用的熒光有機(jī)標(biāo)記的靈敏度。百螢生物為您提供優(yōu)質(zhì)的熒光信號(hào)增強(qiáng)液 FluoroQuest 。

適用儀器

熒光顯微鏡
推薦孔板：	黑色透明

實(shí)驗(yàn)方案

樣品實(shí)驗(yàn)方案

1.將細(xì)胞接種在滑動(dòng)室或無(wú)菌玻璃蓋玻片上，并根據(jù)需要處理細(xì)胞
2.進(jìn)行甲醛固定。在室溫下用PBS中的3.0–4.0％甲醛孵育細(xì)胞10–30分鐘。
3.用PBS清洗固定的細(xì)胞2–3次。
可選：將PBS中的0.1％Triton X-100加入固定細(xì)胞中3至5分鐘以增加通透性。用PBS沖洗細(xì)胞2-3次。
4.用封閉劑（例如在PBS中的5％BSA）封閉30分鐘。
5.按照特定產(chǎn)品的數(shù)據(jù)表中的建議，在稀釋緩沖液中稀釋一抗。覆蓋足夠的稀釋抗體以覆蓋蓋玻片上的細(xì)胞或腔室玻片的每個(gè)腔室。
6.用PBS清洗2-3次。
7.使用前，在室溫下加熱FluoroQuest™熒光信號(hào)增強(qiáng)溶液。
8.稀釋熒光第二抗體在FluoroQuest™熒光信號(hào)在室溫下增強(qiáng)溶液中，然后染色細(xì)胞1小時(shí)。對(duì)于大多數(shù)應(yīng)用，IgG偶聯(lián)物的二抗一般范圍在0.1-10 µg / mL之間。保持蓋玻片覆蓋或在潮濕的室內(nèi)避免蒸發(fā)。
9.用PBS洗滌細(xì)胞3次。
注意：在此步驟可以用熒光核染色劑或鬼筆環(huán)肽進(jìn)行其他染色。
10.將每個(gè)蓋玻片倒入帶有安裝介質(zhì)的清潔幻燈片上，是帶有抗褪色防腐劑的幻燈片。如果需要，用透明的拋光劑密封邊緣。
11.在顯微鏡下用正確的濾光片對(duì)細(xì)胞成像。將幻燈片存放在4°C的黑暗處。