分析方案

概述

準備細胞

添加染料工作溶液

在37°C孵育30分鐘至2小時

在熒光顯微鏡下Ex / Em = 630 / 650nm（Cy5濾光片組）處進行分析

操作方法

1.準備溶酶體染色溶液：

1.1解凍LysoBrite NIR（組分A）至室溫。

1.2通過將20μLLysoBrite NIR（組分A）稀釋到10mL活細胞染色緩沖液（組分B）中制備染料工作溶液。

注1：對于一個96孔板，20μLLysoBrite NIR（組分A）就足夠了。 將未使用的LysoBrite NIR（組分A）等分并儲存在<-20℃。 避光，避免反復凍融循環(huán)。

注2：熒光溶酶體指示劑的濃度根據具體應用而變化。 可以根據特定細胞類型和細胞或組織對探針的滲透性來修改染色條件。

2.準備和染色細胞：

2.1對于粘附細胞：在96孔黑色壁/透明底板（100μL/孔/ 96孔板）中或在裝有適當培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內的蓋玻片上培養(yǎng)細胞。當細胞達到所需的匯合時，加入等體積（如100μL/孔/ 96孔板）的染料加工溶液（來自步驟1.2）。將細胞在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育30分鐘至2小時。使用配有Cy5濾光片的熒光顯微鏡觀察細胞。

注意：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或孵育時間以使染料積累。

2.2對于懸浮細胞：以1,000rpm離心細胞5分鐘以獲得細胞沉淀并吸出上清液。在預熱的生長培養(yǎng)基中輕輕重懸細胞沉淀，然后加入等體積的染料加工溶液（來自步驟1.2）。將細胞在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育30分鐘至2小時。使用配有Cy5濾光器的熒光顯微鏡觀察細胞。

注1：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或培養(yǎng)時間以使染料積累。

注2：懸浮細胞可以附著在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）處理過的蓋玻片上，并作為貼壁細胞染色（見步驟2.1）。

圖1.使用具有Cy5過濾器組的Olympus熒光顯微鏡在Costar黑色96孔板中用Cell Navigator TM溶酶體染色試劑盒染色的Hela細胞的圖像。