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Ex?(nm)	597	Em?(nm)	619
存儲(chǔ)條件	在零下15度以下保存,?避免光照

溶酶體標(biāo)記試劑盒深紅色熒光 是一套熒光成像工具，用于標(biāo)記亞細(xì)胞細(xì)胞器，如膜，溶酶體，線粒體，細(xì)胞核等。該試劑盒使用專有的溶解性染料，可以通過(guò)溶酶體pH梯度選擇性地積聚在溶酶體中，該指示劑的溶質(zhì)是一種疏水性化合物，很容易滲透完整的活細(xì)胞，并被保留在溶酶體內(nèi)，進(jìn)入溶酶體后，其熒光顯著增強(qiáng)，這一關(guān)鍵特征顯著降低了其染色背景。適用于多種不同類型的研究中包括細(xì)胞粘附、趨化性、多藥耐藥性、細(xì)胞活力，細(xì)胞凋亡和細(xì)胞毒性。該試劑盒提供所有的必需組分和細(xì)胞標(biāo)記方法，適用于增殖和非增殖細(xì)胞，可用于懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞。LysoBrite染料的性能明顯優(yōu)于同等的LysoTracker染料（來(lái)自Invitrogen）。LysoBrite染料可以在活細(xì)胞中停留一周以上，對(duì)細(xì)胞的毒性極小，而LysoTracker染料只能使用幾個(gè)小時(shí)，LysoBrite染料可以存活幾代細(xì)胞。此外，LysoBrite染料比LysoTracker染料具有更高的光穩(wěn)定性，百螢生物是為您提供的Cell Navigator 溶酶體標(biāo)記試劑盒。溶酶體標(biāo)記試劑盒深紅色熒光 是美國(guó)AAT Bioquest研發(fā)的產(chǎn)品。

適用儀器

熒光顯微鏡
Ex:	Texas Red 濾波片組
Em：	Texas Red 濾波片組
推薦孔板:	黑色透明底板

實(shí)驗(yàn)方案

試驗(yàn)方案

準(zhǔn)備細(xì)胞
添加LysoBriteDeep Red染料工作溶液
在37°C孵育30分鐘至60分鐘
添加染色緩沖液
室溫孵育30分鐘
在熒光顯微鏡下Ex/Em =590/620nm（Texas Red濾光片組）處進(jìn)行分析

注意：1）實(shí)驗(yàn)前，取出試劑盒進(jìn)行室溫凍結(jié)。

樣品示例及使用方法

1.準(zhǔn)備溶酶體染色溶液：

1.1 取出試劑盒中A、B、C組分，室溫避光靜置5-10min。

1.2 移取10μL LysoBrite Deep Red（組分A），用5mL細(xì)胞染色緩沖液（組分B）進(jìn)行稀釋，制備染料工作液。

注意：1) 10μL的500X LysoBrite Deep Red（組分A）足夠完成一個(gè)96孔板，根據(jù)要求分裝并儲(chǔ)存未使用的500X LysoBrite Deep Red（組分A），避免反復(fù)凍融。

2)熒光溶酶體指示劑的濃度根據(jù)實(shí)際應(yīng)用而改變，可以根據(jù)探針的滲透性對(duì)細(xì)胞類型、細(xì)胞或組織的染色條件進(jìn)行調(diào)整。

2.細(xì)胞染色：

對(duì)于貼壁細(xì)胞：

在96孔黑色墻壁/透明底板（50μL/孔/ 96孔板）或裝有適當(dāng)培養(yǎng)基內(nèi)的培養(yǎng)皿的蓋玻片上培養(yǎng)細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到所需的匯合時(shí)，在96孔板或培養(yǎng)皿內(nèi)加入1/2的LysoBrite Deep Red工作液，在37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)箱中孵育30分鐘至60分鐘，將(50 µL /孔/96孔板）的染色緩沖液B（組分C）加入LysoBrite Deep Red工作溶液板中，在室溫下孵育15-30分鐘。再使用配有Texas Red 濾片組的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞，使之帶深紅色熒光(Ex/Em = 590/620 nm)。

注意：1）LysoBrite Deep Red對(duì)細(xì)胞的毒性很小或沒(méi)有，它可以用于細(xì)胞跟蹤。為了進(jìn)行細(xì)胞跟蹤，可跳過(guò)添加染色緩沖液B的步驟，只需將染料工作液替換為生長(zhǎng)培養(yǎng)基，然后在熒光顯微鏡下觀察即可。如果細(xì)胞看起來(lái)沒(méi)有充分染色，建議適當(dāng)增加染料濃度或孵育時(shí)間。

對(duì)于懸浮細(xì)胞：

在1000rpm條件下離心培養(yǎng)液5分鐘，得到細(xì)胞沉淀并棄去上清液，在預(yù)熱（37℃）生長(zhǎng)培養(yǎng)基例如（100 µL /管）中輕輕重懸細(xì)胞沉淀，然后添加1/2體積（50 µL /管）LysoBrite Deep Red工作溶液。在37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)箱中孵育30分鐘至60分鐘，將(50 µL /孔/96孔板）的染色緩沖液B（組分C）加入LysoBrite Deep Red工作溶液板中,在室溫下孵育15-30分鐘。再使用配有Texas Red 濾片組的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞，使之帶深紅色熒光(Ex/Em = 590/620 nm)。

注意: 1）LysoBrite Deep Red對(duì)細(xì)胞的毒性很小或沒(méi)有。它可以用于細(xì)胞跟蹤。為了進(jìn)行細(xì)胞跟蹤，可跳過(guò)添加染色緩沖液B的步驟，只需將染料工作液替換為生長(zhǎng)培養(yǎng)基，然后在熒光顯微鏡下觀察即可。如果細(xì)胞看起來(lái)沒(méi)有充分染色，建議適當(dāng)增加染料濃度或孵育時(shí)間。

2）懸浮細(xì)胞可以附著在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）處理過(guò)的蓋玻片上，并作為貼壁細(xì)胞染色。

示例數(shù)據(jù)分析及圖示