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Ex (nm)	345	Em (nm)	450
儲(chǔ)存條件	在零下15度以下保存, 避免光照

肌動(dòng)蛋白（F-Actin）標(biāo)記試劑盒藍(lán)色熒光是一套熒光成像工具，用于標(biāo)記亞細(xì)胞細(xì)胞器，如膜，溶酶體，線粒體，細(xì)胞核等?；罴?xì)胞區(qū)的選擇性標(biāo)記為研究空間細(xì)胞事件提供了一種強(qiáng)大的方法。

該特定試劑盒設(shè)計(jì)用于標(biāo)記藍(lán)色熒光中固定細(xì)胞的F-肌動(dòng)蛋白。該試劑盒使用藍(lán)色熒光鬼筆環(huán)肽綴合物，其選擇性結(jié)合F-肌動(dòng)蛋白。鬼筆環(huán)肽綴合物具有Ex / Em = 350 / 450nm，與大多數(shù)熒光顯微鏡附帶的DAPI濾光片組相容。它是一種高親和力探針，用于標(biāo)記，鑒定和定量甲醛固定和透化組織切片，細(xì)胞培養(yǎng)或無細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的F-肌動(dòng)蛋白。肌動(dòng)蛋白（F-Actin）標(biāo)記試劑盒藍(lán)色熒光是由美國AAT Bioquest 研發(fā)的。

適用儀器

熒光顯微鏡
Ex:	350 nm
Em：	450nm
推薦孔板:	黑色透明底板
推薦通道:	DAPI 通道

實(shí)驗(yàn)方案

分析方案

概述

準(zhǔn)備樣品（微孔板孔）

從板上取下液體加入100μL/孔的iFluor 350-Phalloidin溶液

在室溫下染色細(xì)胞15到60分鐘

洗滌細(xì)胞

在Ex / Em = 350 / 450nm下在顯微鏡下觀察樣品

操作方法

1.準(zhǔn)備1X iFluor 350-鬼筆環(huán)肽工作溶液：

將10μL的iFluor 350-鬼筆環(huán)肽（組分A）加入10mL標(biāo)記緩沖液（組分B）中。

注1：未使用的iFluor 350-鬼筆環(huán)肽原液（組分A）應(yīng)等分并保存在-20℃，避光。

注2：不同的細(xì)胞類型可能染色不同。應(yīng)相應(yīng)地制備iFluor 350-鬼筆環(huán)肽工作溶液的濃度。

2.染色細(xì)胞：

2.1執(zhí)行甲醛固定。在室溫下用3.0-4.0％甲醛的PBS孵育細(xì)胞10-30分鐘。

注意：避免使用任何含甲醇的固定劑，因?yàn)榧状紩?huì)在固定過程中破壞肌動(dòng)蛋白。優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛。

2.2用PBS沖洗固定的細(xì)胞2-3次。

2.3可選：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定細(xì)胞（步驟2.2）3至5分鐘，以增加滲透性。用PBS沖洗細(xì)胞2-3次。

2.4將100μL/孔（96孔板）的1X iFluor™350-鬼筆環(huán)肽工作溶液（來自步驟1）加入固定的細(xì)胞（來自步驟2.2或2.3），并在室溫下染色細(xì)胞15至60分鐘。

2.5用PBS輕輕沖洗細(xì)胞2至3次以去除多余的染料，然后使用DAPI通道進(jìn)行板密封和成像。

圖1.用甲醛固定并用Cell Navigator F-肌動(dòng)蛋白標(biāo)記試劑盒染色的CPA細(xì)胞的圖像*在Costar黑色96孔板中的藍(lán)色熒光* A：用1X iFluor 350-鬼筆環(huán)肽標(biāo)記細(xì)胞僅30分鐘。 B：用鬼筆環(huán)肽處理細(xì)胞10分鐘，然后用1X iFluor 350-鬼筆環(huán)肽染色30分鐘。