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Ex?(nm)	658	Em?(nm)	691
分子量	N/A	溶劑	DMSO
儲(chǔ)存條件	在零下15度以下保存,?避免光照

MitoLite 線粒體近紅外熒光探針是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于染色線粒體的熒光探針，線粒體是在大多數(shù)真核細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的膜封閉細(xì)胞器。線粒體產(chǎn)生大多數(shù)細(xì)胞中的ATP供應(yīng)。線粒體除了提供細(xì)胞能量外，還參與一系列其他過(guò)程，例如信號(hào)傳導(dǎo)，細(xì)胞分化，細(xì)胞死亡以及細(xì)胞周期和細(xì)胞生長(zhǎng)的控制。線粒體與多種人類疾病有關(guān)，包括線粒體疾病和心臟功能障礙，并可能在衰老過(guò)程中起作用。Mitolite NIR FX690設(shè)計(jì)用于通過(guò)近紅外熒光標(biāo)記活細(xì)胞中的線粒體。它可能通過(guò)線粒體膜電位梯度選擇性地積累在線粒體中。對(duì)于低背景和高信噪比至關(guān)重要的活細(xì)胞和組織成像，它是理想的選擇。這種熒光的線粒體指示劑帶有細(xì)胞保留基團(tuán)，因此可以在線粒體中保留很長(zhǎng)時(shí)間。此關(guān)鍵功能大大提高了染色效率。它可用于多種研究，包括細(xì)胞粘附，趨化性，多藥耐藥性，細(xì)胞生存力，細(xì)胞凋亡和細(xì)胞毒性。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供的MitoLite 線粒體近紅外熒光探針。

實(shí)驗(yàn)方案

樣品實(shí)驗(yàn)方案

1.準(zhǔn)備線粒體染色溶液：

1.1將MitoLite 染料加熱至室溫。

1.2通過(guò)將20 µL的500 X Mitolite 染料稀釋到10 mL的Hanks和20 mm Hepes緩沖液或您選擇的緩沖液（HBSS）中來(lái)制備染料工作液。

注1：20 µL Mitolite 染料足以用于一塊96孔板。分裝并在<-15℃下存儲(chǔ)未使用的MitoLite 染料原液。避免光照，并避免重復(fù)的凍融循環(huán)。

注2：熒光線粒體指示劑的濃度因具體應(yīng)用而異。可以根據(jù)特定的細(xì)胞類型和細(xì)胞或組織對(duì)探針的滲透性來(lái)改變?nèi)旧珬l件。

2.準(zhǔn)備和染色細(xì)胞：

2.1對(duì)于貼壁細(xì)胞：a）在96孔黑色壁/透明底板（100 µL /孔/ 96孔板）中或在裝有適當(dāng)培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)的蓋玻片上生長(zhǎng)細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到所需的匯合度時(shí)，添加等體積的染料工作溶液（來(lái)自步驟1.2）。 b）將細(xì)胞在37°C，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育30分鐘至2小時(shí)。 C）更換染料加載溶液，或用預(yù)熱的（37°C）漢克斯和20 mM Hepes緩沖液（HBSS）或您選擇的緩沖液（例如，含有1：1濃度的生長(zhǎng)培養(yǎng)基的緩沖液）洗滌細(xì)胞（尤其對(duì)于cat＃22679））。用HBSS或生長(zhǎng)培養(yǎng)基填充細(xì)胞孔。 d）。使用裝有所需濾光片組的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。

注意：建議增加標(biāo)記濃度或孵育時(shí)間，以使染料在細(xì)胞未充分染色的情況下積累。

2.2對(duì)于懸浮細(xì)胞：以1000 rpm離心細(xì)胞5分鐘，以獲得細(xì)胞沉淀并吸出上清液。在預(yù)熱的（37°C）生長(zhǎng)培養(yǎng)基中輕輕重懸細(xì)胞沉淀，并加入等體積的染料工作溶液（來(lái)自步驟1.2）。將細(xì)胞在37°C，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育30分鐘至2小時(shí)。更換染料加載溶液或用Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HH緩沖液）或您選擇的緩沖液（例如具有1：1濃度的生長(zhǎng)培養(yǎng)基的緩沖液）洗滌細(xì)胞（特別是對(duì)于cat＃22679）。用HBSS或生長(zhǎng)培養(yǎng)基填充細(xì)胞孔。使用裝有所需濾光片組的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。

注1：建議增加標(biāo)記濃度或孵育時(shí)間，以使染料在細(xì)胞似乎未充分染色的情況下積累。

注2：懸浮細(xì)胞可以附著在已經(jīng)用BDCell-Tak®（BD Biosciences）處理過(guò)并被染色為貼壁細(xì)胞的蓋玻片上（參見(jiàn)步驟2.1）。