樣本標記分析

注意：該標記方案是針對山羊抗小鼠IgG與ICG的綴合物開發(fā)的。

1.準備蛋白質(zhì)儲備溶液（溶液A）：

將100L反應(yīng)緩沖液（例如，1M碳酸鈉溶液或1M磷酸鹽緩沖液，pH~9.0）與900L目標蛋白質(zhì)溶液（例如抗體，蛋白質(zhì)濃度> 2mg / ml，）混合，得到1 mL蛋白標記儲備液。

注意1：蛋白質(zhì)溶液（溶液A）的pH值應(yīng)為8.5±0.5。 如果蛋白質(zhì)溶液的pH低于8.0，則需使用1M碳S氫鈉溶液或1M pH 9.0磷酸鹽緩沖液將pH調(diào)節(jié)至8.0-9.0的范圍。

注意2：蛋白質(zhì)應(yīng)溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）中。如果蛋白質(zhì)溶解在Tris或甘an酸緩沖液中，則必須用pH7.2-7.4的1X PBS透析，以除去用于蛋白質(zhì)沉淀的游離胺或銨鹽（例如硫酸銨和乙酸銨）。

注意3：牛血清白蛋白（BSA）、明膠穩(wěn)定不純的抗體等標記的效果不理想。 疊D化鈉或硫柳汞的存在也可能干擾綴合反應(yīng)。 可以通過透析或旋轉(zhuǎn)柱除去疊D化鈉或硫柳汞，以獲得標記結(jié)果。

注意4：如果蛋白質(zhì)濃度低于2 mg / mL，則結(jié)合效率明顯降低。 為獲得標記效率，建議蛋白質(zhì)濃度范圍為2-10 mg / mL。

2.準備染料儲備溶液（溶液B）：

將無水DMSO加入到ICG染料小瓶中以制備10-20mM儲備溶液。 通過移液或渦旋混合均勻。

注意：在開始綴合之前準備染料儲備溶液（溶液B），現(xiàn)配現(xiàn)用，保持溶液新鮮。 染料儲備溶液的長期儲存可降低染料活性。 溶液B可以在不受光照和潮濕的情況下儲存在冰箱中兩周。 避免凍融循環(huán)。