ReadiPrep 線粒體/細胞質分離試劑盒 熒光探針提供了從哺乳動物細胞或組織中分離線粒體和細胞質組分的便捷方法。 分離的線粒體是完整的，可以用線粒體標記（例如MitoLite Green）進行陽性染色。 分離的線粒體保留其生物學活性，并與許多下游應用兼容，包括研究線粒體呼吸，線粒體膜電位，凋亡，mtDAN和mtRNA以及線粒體蛋白譜分析等。該試劑盒提供了兩種分離線粒體的選擇。 一種選擇是利用基于試劑的方法，該方法允許同時進行多個樣品制備。 第二種選擇是利用Dounce均質化。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的ReadiPrep 線粒體/細胞質分離試劑盒 熒光探針。

產品說明書

樣品實驗方案

簡要概述

1. 用PBS洗滌細胞

2. 加入2 mL隔離緩沖液

3. 在冰上孵育10分鐘

4. 使用均質器均質化細胞或添加試劑A。

5. 7000g離心10分鐘

6. 去除上清液（細胞質部分）

7. 將沉淀重懸于隔離緩沖液中

8. 7000g離心10分鐘

9. 將沉淀重懸于測定緩沖液（線粒體級分）中

實驗步驟

1.用冷PBS洗滌細胞一次。 對于懸浮的細胞，請通過離心收集細胞。

2.向細胞中加入2 mL分離緩沖液（組分A），并在冰上孵育10分鐘。

3.可以通過兩種方式提取細胞質。

①：將40 µL試劑A（組分B）加入混合物中，渦旋并在冰上孵育10分鐘。

②：使用Dounce組織研磨機勻漿4-5次，使細胞勻漿。

4.在4°C下以600 g離心10分鐘，收集上清液，在4°C下以7,000 g離心10分鐘。 上清是細胞質部分。

5.將沉淀重懸于1 mL分離緩沖液（組分A）中，并在4°C下以7,000 g離心10分鐘。

6.丟棄上清液，并根據下游應用將沉淀重懸在適當的測定緩沖液中。

7.蛋白質濃度可以通過Amplite 熒光熒光胺蛋白質定量試劑盒（Cat＃11100）進行定量。

圖示

圖1.使用ReadiPrep 線粒體/細胞質分離試劑盒收集HeLa細胞的線粒體組分。 通過Amplite 熒光熒光胺蛋白質定量試劑盒（＃11100）對蛋白質進行定量。 在有或沒有MitoLite Green（＃22675）的情況下孵育100 µg線粒體片段，并用NovoCyte 3000流式細胞儀進行測定。