線粒體膜電位熒光探針JC-1 CAS 3520-43-2是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于線粒體膜電位檢測的試劑，JC-1廣泛用于通過流式細胞術(shù)確定線粒體膜電位。它能夠選擇性地進入線粒體，并且隨著線粒體膜電位增加（超過約80-100mV的值）可逆地將其顏色從綠色變?yōu)槌壬＿@種性質(zhì)是由于線粒體膜極化后JC-1聚集體的可逆形式導致發(fā)射光從530nm（即JC-1單體形式的發(fā)射）轉(zhuǎn)變?yōu)?90nm（即J-聚集形式的發(fā)射）。當在490nm處激發(fā)時，隨著線粒體膜變得更加極化，JC-1的顏色從綠色橙色可逆地變?yōu)榫G色橙色。使用通常安裝在所有流式細胞儀中的濾波器可以檢測兩種顏色，可以在熒光通道1（FL1）中分析綠色發(fā)射，在通道2（FL2）中分析綠色橙色發(fā)射。使用JC-1的主要優(yōu)點是，它可以從綠色到橙色熒光發(fā)射轉(zhuǎn)移，它既可以定性，又可以在FL1和FL2通道中檢測到純熒光強度又可以定量。除了廣泛用于流式細胞儀外，JC-1還用于熒光成像。我們已經(jīng)開發(fā)出一種在熒光酶標儀平臺中使用它的方案，盡管JC-1在許多實驗室中被廣泛使用，但其水溶性差使得它在某些應用中難以使用。我們的JC-10具有比JC-1更好的水溶性，并且JC-10在一些細胞系中具有優(yōu)于JC-1的性能。百螢生物是AAT Bioquest 的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的線粒體膜電位熒光探針JC-1 CAS 3520-43-2。

JC-1樣品分析方案

概述

用測試化合物制備細胞

添加JC-1工作溶液（100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板）在室溫或37℃孵育1小時

移除JC-1工作溶液

讀取 Ex / Em = 490 / 525nm和490 / 590nm處的熒光強度

注意：以下是我們推薦的活細胞方案。該方案僅提供指南，實際情況應根據(jù)您的具體實驗進行調(diào)整修改。

1.準備JC-1工作溶液：

1.1在高質(zhì)量無水DMSO中制備2至10 mM JC-1的儲備液。 應隨用隨配及時使用或等分配制，應將使用剩余的溶液等分并在<-20℃冷凍。

注意：避免反復凍融循環(huán)，避免光照。

1.2制備1X JC-1工作溶液：在實驗當天，將JC-1固體溶解在DMSO中或?qū)⒌确衷嚇拥腏C-1儲備溶液解凍至室溫。在Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或其他緩沖液（pH 7）和0.02％Pluronic®F-127中制備10至30μM1XJC-1工作溶液。

注意：JC-1不溶于水，因此它會在溶液中聚集。 建議在將JC-1工作溶液加載到微孔板之前對其進行過濾。

2.用熒光酶標儀進行JC-1檢測：

2.1用測試化合物細胞培養(yǎng)所需的一段時間（例如，Jurkat細胞可以用*樹堿處理4-6小時）以誘導細胞凋亡。對于空白孔（沒有細胞的培養(yǎng)基），加入相應量的化合物緩沖液。

2.2將100μL/孔的96孔板或25μL/孔的384孔板的JC-1工作溶液（來自步驟1.2）加入到細胞板中。

2.3將JC-1加載在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)15-60分鐘。

注意：適當?shù)姆跤龝r間取決于所使用的單個細胞類型和細胞濃度，每個實驗的孵育時間需要根據(jù)相應實驗進行控制。

2.4從平板上取下JC-1工作溶液，用HHBS或其他緩沖液清洗細胞。 將100μL/孔的96孔板或25μL/孔的384孔HHBS板加回到細胞板中。

2.5監(jiān)測Ex / Em = 490 / 525nm和490 / 590nm處的熒光變化以進行比率分析。

3.用熒光顯微鏡或流式細胞儀進行JC-1測定：

3.1用測試化合物細胞培養(yǎng)所需的一段時間（例如，Jurkat細胞可以用*樹堿處理4-6小時）以誘導細胞凋亡。

3.2離心細胞，每管取1-5×105個細胞。

3.3在500μLJC-1工作溶液中重懸細胞（來自步驟1.2）。

3.4在室溫或37°C下避光孵育10至30分鐘。

3.5用HHBS或其他緩沖液洗滌細胞。將細胞重懸于500μLHHBS中以獲得每管1-5×105個細胞。

3.6用熒光顯微鏡（使用FITC和TRITC濾光片）或流式細胞儀（使用FL1和FL2通道）觀察Ex / Em = 490 / 525nm和490 / 590nm處的熒光變化。