鈉離子熒光探針SoNa 520 AM是 SoNa™ 520 的細(xì)胞滲透版本，用于監(jiān)測(cè)活細(xì)胞中的鈉離子。 SoNa™ 520 是一種新型鈉敏感熒光指示劑染料，用于檢測(cè)生物樣品中的鈉含量。它是一種熒光染料，與鈉離子結(jié)合后熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng)。通過(guò)測(cè)量發(fā)射的熒光強(qiáng)度，研究人員可以評(píng)估生物樣品中的鈉離子濃度或研究鈉離子在生物刺激下如何變化。與其他的熒光鈉離子指示劑（例如 SBFI 和Corona Red）相比，它可能具有Z高的檢測(cè)靈敏度。它可用于測(cè)量活細(xì)胞和其他生物樣品中鈉濃度的變化。與Z常見的 SBFI 相比，SoNa™ 520 更加靈敏，在相同條件下具有更大的熒光響應(yīng)。此外，SoNa™ 520 可以用可見 488 nm 激光或類似的可見光很好地激發(fā)，以避免激發(fā) SBFI 所需的紫外線激發(fā)。一般來(lái)說(shuō)，紫外線激發(fā)會(huì)對(duì)細(xì)胞和其他生物樣品造成巨大損害，并且比可見光更快地光漂白染料探針。鈉離子指示劑的使用使科學(xué)家能夠研究與鈉相關(guān)的各種生理過(guò)程，例如鈉離子通道活性、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和鈉穩(wěn)態(tài)。 百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的鈉離子熒光探針SoNa 520 AM。

溶液配制

儲(chǔ)備溶液配制

SoNa™ 520 AM 儲(chǔ)備溶液配制

在高質(zhì)量無(wú)水 DMSO 中制備 2 至 5 mM SoNa™ 520 AM 儲(chǔ)備溶液。

工作溶液配制

SoNa™ 520 AM 工作溶液配制

實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，將 SoNa™ 520 AM 溶解在 DMSO 中，或?qū)⒌确葜甘緞﹥?chǔ)備溶液解凍至室溫。在您選擇的緩沖液（例如 Hanks 和 Hepes 緩沖液）中用 0.04% Pluronic® F-127 制備 2 至 20 µM 的染料工作溶液。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞系，建議終濃度為 5-10 μM 的 SoNa™ 520。細(xì)胞加載所需指示劑的準(zhǔn)確濃度必須根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定。

注意：非離子洗滌劑 Pluronic® F-127 有時(shí)用于增加 SoNa™ 520 AM 的水溶性。可以從百螢購(gòu)買各種 Pluronic® F-127 溶液。

注意：如果您的細(xì)胞含有有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，可將丙H舒 (1-2 mM) 添加到染料工作溶液中（孔中的最終濃度為 0.5-1 mM），以減少脫酯指示劑的泄漏。各種 ReadiUse™ 丙H舒產(chǎn)品，包括水溶性、鈉鹽和穩(wěn)定溶液，均可從百螢購(gòu)買。

操作步驟

以下是我們推薦的將 AM 酯加載到活細(xì)胞中的方案。該步驟僅提供指導(dǎo)，實(shí)際應(yīng)根據(jù)您的具體需求進(jìn)行修改。

1.在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞過(guò)夜。

2.第二天，將 1X SoNa™ 520 AM 工作溶液添加到細(xì)胞板中。

注意：如果您的化合物干擾血清，請(qǐng)?jiān)谏蠘忧坝眯迈r的 HHBS 緩沖液替換生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

3.將載有染料的孔板/培養(yǎng)板在細(xì)胞培養(yǎng)箱中于 37°C 下孵育 1 至 2 小時(shí)。

注意：孵育染料超過(guò) 2 小時(shí)可以提高某些細(xì)胞系的信號(hào)強(qiáng)度。

4.用 HHBS 或您選擇的緩沖液（包含陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抑制劑，例如 1 mM 丙H舒，如果適用）替換染料工作溶液，以去除任何多余的探針。

5.根據(jù)需要添加刺激劑，同時(shí)使用配備 FITC 濾光片組的熒光顯微鏡或包含可編程液體處理系統(tǒng)（例如 FDSS、FLIPR 或 FlexStation）的熒光酶標(biāo)儀在 Ex/Em = 490/525 nm 處測(cè)量熒光。