AKTATM pure
AKTA pure(圖1)是一臺(tái)靈活和直觀的層析系統(tǒng),可用于快速純化從微克到克水平的蛋白、肽和核酸等目標(biāo)產(chǎn)物。同時(shí)AKTA TM pure 是一臺(tái)可靠的系統(tǒng),它的硬件以及UNICORN TM軟件與各種層析柱和填料一起可滿足任何純化挑戰(zhàn)。系統(tǒng)支持各種層析技術(shù),并滿足需要提供1高純度的自動(dòng)化要求。系統(tǒng)配置靈活,并可以根據(jù)您的需要隨時(shí)升級(jí),進(jìn)一步提高其性能。AKTA pure系統(tǒng)是在蛋白領(lǐng)域超過五十年研究經(jīng)驗(yàn)和三十年AKTA純化系統(tǒng)開發(fā)經(jīng)驗(yàn)的結(jié)晶。
AKTA pure 提供兩種型號(hào):AKTA pure 5適合廣泛的科研應(yīng)用和多用戶環(huán)境下的純化任務(wù);AKTA pure 150適合在大規(guī)模純化下優(yōu)化資源利用和提高產(chǎn)能。
AKTA pure具有以下優(yōu)點(diǎn):
·多樣化選擇的模塊化系統(tǒng)設(shè)計(jì)可以靈活的應(yīng)用在蛋白質(zhì)和多肽的純化中·客戶定制的系統(tǒng)可隨著您的研究需要的發(fā)展輕松的升級(jí)·系統(tǒng)設(shè)計(jì)理念來源于*的AKTA avant,可靠性值得信賴·UNICORN6軟件提供簡(jiǎn)單、直觀和靈活的預(yù)編程方法模板和系統(tǒng)控制,可簡(jiǎn)化您的工作·可用于所有GE Healthcare 實(shí)驗(yàn)室規(guī)模層析柱
層析系統(tǒng)概述
AKTA pure層析系統(tǒng)是一款高度靈活配置的模塊化系統(tǒng),具有許多優(yōu)點(diǎn)來進(jìn)行穩(wěn)定的純化。
系統(tǒng)由AKTA pure硬件和UNICORN6控制軟件組成。系統(tǒng)采用模塊化設(shè)計(jì),所有閥門、檢測(cè)器和層析柱面向操作者安裝,可以清楚了解各個(gè)模塊之間的關(guān)系(了解樣品和緩沖液的流向非常簡(jiǎn)單)(圖)。各種可選模塊的附加組件如閥門、檢測(cè)器和傳感器可以很容易地被添加到所用位置。用于層析柱夾和設(shè)備連接的多軌道位于儀器的前部和一側(cè)。儀器頂部的緩沖液托盤提供容器和溶液瓶的存放區(qū)域。儀器的控制面板顯示系統(tǒng)的狀態(tài),并且可以通過觸摸按鈕進(jìn)行運(yùn)行操作(暫停/繼續(xù))。
基本配置的系統(tǒng)僅重48kg,選擇所有選配組件時(shí)重51kg。相對(duì)低的重量使它能夠更簡(jiǎn)單地被放置在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,系統(tǒng)尺寸使它可以更方便地安裝在標(biāo)準(zhǔn)的層析冷柜中,用于不穩(wěn)定樣品的純化。
無論采用何種配置,AKTA pure都帶有兩個(gè)高性能的系統(tǒng)泵、用于層析柱保護(hù)的系統(tǒng)壓力表、混合器、進(jìn)樣閥和紫外檢測(cè)器。AKTA pure具有廣泛的可選模塊,可以產(chǎn)生大量的可能性配置。這個(gè)系統(tǒng)的管路流程設(shè)計(jì)能減少譜帶展寬效應(yīng),而且在流路中所使用的所有接觸液體材料都是生物兼容的,并耐受常規(guī)使用的溶劑。儀器的正面設(shè)計(jì)有預(yù)留模塊位置,可以安裝選配的閥門或檢測(cè)器以便能夠進(jìn)行靈活的流路配置。AKTApure的兩個(gè)系統(tǒng)配置例子如圖所示。
UNICORN6控制軟件可以快速簡(jiǎn)單地創(chuàng)建方法和開始運(yùn)行。
UNICORN6無需編程技巧,因?yàn)閷游龇椒ǖ慕⒂珊?jiǎn)單的拖拽操作就可以完成。此外,這個(gè)軟件是模塊化的,可以增加一些如Column Logbook 和Design of Experiments/DoEl功能用于方法開發(fā)。用于遠(yuǎn)程訪問系統(tǒng)/創(chuàng)建方法或評(píng)估結(jié)果的許可選項(xiàng)可提供更大的便利。
以下章節(jié)為AKTA pure系統(tǒng)組件和選配組件詳細(xì)的介紹。
AKTA pure 標(biāo)準(zhǔn)組件
系統(tǒng)泵
兩個(gè)系統(tǒng)泵都是建立在為AKTA avant系統(tǒng)而開發(fā)的現(xiàn)代化技術(shù)的基礎(chǔ)上。堅(jiān)固的結(jié)構(gòu)可以在低和高反壓下提供可重現(xiàn)的流速,可縮短純化時(shí)間。
每個(gè)泵都由一對(duì)泵頭組成,為混合器提供低脈沖液流。所產(chǎn)生的連續(xù)和準(zhǔn)確的流速能夠進(jìn)行可重現(xiàn)的線性或梯度洗脫。對(duì)于AKTA pure5來說,系統(tǒng)泵的操作壓力1高可達(dá)0MPa,可提供的1大流速為5ml/min。對(duì)于AKTA pure150來說,系統(tǒng)泵的操作壓力1高可達(dá)5MPa,可提供的1大流速為150ml/min的1大裝柱流速。系統(tǒng)壓力檢測(cè)器連接到系統(tǒng)泵上,連續(xù)測(cè)量系統(tǒng)壓力,并能夠自動(dòng)調(diào)整流速以避免達(dá)到設(shè)定的壓力上限。
混合器
混合器能夠在梯度運(yùn)行期間確保均勻的緩沖液組成?;旌掀鞔笮〉倪x擇取決于流速和所使用的緩沖液。所提供的標(biāo)準(zhǔn)混合器大小為1.4ml。也可選擇0.6ml和5ml混合器。
對(duì)于更高流速或難以混合的緩沖液需要更大的混合器。
混合器上整合了一個(gè)在線濾器。濾膜容易更換,更換混合器也比較容易,直接從混合器支架上嵌入或抽出即可。
進(jìn)樣閥
進(jìn)樣閥允許使用樣品環(huán)或SuperloopTm的各種上樣技術(shù)。在各種不同進(jìn)樣技術(shù)之間變化時(shí),新型的閥門設(shè)計(jì)無需更換管路的連接方式。樣品環(huán)可以經(jīng)過注射器或利用進(jìn)樣泵進(jìn)行手動(dòng)填充;相同的進(jìn)行選型也適用于Superloop的使用。還可以使用系統(tǒng)泵填充樣品環(huán)。
也可以使用選配的樣品泵或系統(tǒng)泵直接把樣品上樣到層析柱上。
紫外檢測(cè)器
AKTA pure 系統(tǒng)有固定波長(zhǎng)的紫外檢測(cè)器或可變的多波長(zhǎng)紫外和可見光檢測(cè)器。固定波長(zhǎng)(80nm)紫外檢測(cè)器(U9-L)采用LED技術(shù),它既耐用又可靠,無需預(yù)熱開機(jī)即可使用。此外,紫外檢測(cè)器U9-L不會(huì)使樣品變熱。這種檢測(cè)器標(biāo)配一個(gè)mm流動(dòng)池,當(dāng)需要更高靈敏度檢測(cè)時(shí)提供有一個(gè)備選的5mm 流動(dòng)池。
為了在不同波長(zhǎng)測(cè)定蛋白質(zhì),紫外檢測(cè)器U9-M(圖1)可用于從190到700nm的紫外和可見光譜中的多波長(zhǎng)檢測(cè)。紫外檢測(cè)器U9-M可以同時(shí)檢測(cè)三個(gè)波長(zhǎng)(圖1和6)。當(dāng)純化具有不同蛋白濃度的樣品時(shí),為了獲得1佳性能,提供有三個(gè)不同光徑的流動(dòng)池備選:0.5mm,mm(標(biāo)配),10mm。1佳流動(dòng)池設(shè)計(jì)和光纖技術(shù)提供高信噪比,不會(huì)引起紫外流動(dòng)池的任何局部加熱。檢測(cè)器含有高靈敏度的長(zhǎng)壽命氬燈,需要1短的啟動(dòng)時(shí)間。每次儀器開啟時(shí),檢測(cè)器自動(dòng)校正。
所有U9-M在出廠時(shí)進(jìn)行了標(biāo)定。UV信號(hào)會(huì)自動(dòng)同步可以幫助比較來自不同系統(tǒng)的數(shù)據(jù)。
利用多波長(zhǎng)檢測(cè)可以用于發(fā)現(xiàn)污染物,特別是標(biāo)記蛋白,或在80nm沒有吸收值的目標(biāo)分子。例如,在14、80和140nm波長(zhǎng)下監(jiān)測(cè)分子量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品。在14nm的檢測(cè)揭示所有蛋白的肽鍵對(duì)于濃度以及目標(biāo)蛋白在80nm的消光系數(shù)很低的樣品可能會(huì)很有用。鐵蛋白是一種多聚體儲(chǔ)鐵蛋白,由于在分子中心存在大量的鐵離子,它在140nm顯示出比其他蛋白更強(qiáng)的吸光值(圖1)。
紫外檢測(cè)器U9-L和紫外檢測(cè)器U9-M可以與第二個(gè)紫外檢測(cè)器U9-L結(jié)合使用以提供更多的應(yīng)用,例如多步純化或用于使用不同大小的流動(dòng)池以同時(shí)檢測(cè)低濃度和高濃度蛋白。
電導(dǎo)檢測(cè)器
電導(dǎo)檢測(cè)器用于監(jiān)測(cè)緩沖液和樣品的電導(dǎo)率,在線檢測(cè)真實(shí)的梯度。電導(dǎo)檢測(cè)器整合溫度傳感器,可以校正由溫度引起的電導(dǎo)率的變化。電導(dǎo)檢測(cè)器具有廣泛的讀數(shù)范圍,能夠用在所有不同的層析技術(shù)中監(jiān)測(cè)電導(dǎo)。
層析系統(tǒng):AKTA pure 增強(qiáng)自動(dòng)化的選配模塊
上樣選項(xiàng)
選配的樣品泵(圖4)設(shè)計(jì)用于直接自動(dòng)進(jìn)樣到層析柱上,或經(jīng)樣品環(huán)或Superloop間接進(jìn)樣。使用樣品泵,省去辛苦的進(jìn)樣步驟從而節(jié)省時(shí)間,當(dāng)處理大體積樣品時(shí)尤其有用。泵由兩個(gè)泵頭組成,其建立在與系統(tǒng)泵相同的泵原理基礎(chǔ)上??梢院苋菀椎刈詣?dòng)進(jìn)行泵的潤(rùn)洗和空氣去除。樣品泵裝有壓力傳感器,通過控制樣品流速保護(hù)層析柱,同時(shí)防止超壓暫停和盡可能減少上樣時(shí)間。通過使用樣品泵,樣品可以以1高50ml/min(樣品泵S9)或著150ml/min(樣品泵S9H)的流速上樣。
選配的進(jìn)樣閥V9-Is或者V9H-IS是為了與樣品泵一起使用。它允許多達(dá)7個(gè)不同樣品的快速、自動(dòng)進(jìn)樣。整合的空氣傳感器確保安全和完整的上樣,無需預(yù)先設(shè)定樣品體積。閥門有7個(gè)進(jìn)樣位置和一個(gè)專門的緩沖液進(jìn)口,用于在樣品上樣前利用緩沖液充滿樣品泵,以及用于兩個(gè)樣品上樣之間沖洗閥門和泵。在進(jìn)樣過程中,當(dāng)樣品*上樣時(shí)空氣感應(yīng)器開始檢測(cè),以便使方法繼續(xù)到下一步而氣泡不會(huì)進(jìn)入流路或?qū)游鲋?/p>
緩沖液選擇
AKTA pure 可以選配有兩種不同類型的入口閥,可以進(jìn)行緩沖液和洗脫溶液的選擇。多個(gè)入口的閥門確保清洗緩沖液隨時(shí)在線,方便定期清洗層析柱和系統(tǒng)。
入口選擇閥V9-lAB在單個(gè)閥門中含有4個(gè)進(jìn)口位置,可為緩沖液自動(dòng)化選擇和進(jìn)行基本層析時(shí)層析柱和系統(tǒng)運(yùn)行后的清洗提供便利。
入口自動(dòng)化閥(V9-lA,V9-1B)提供多達(dá)x7個(gè)進(jìn)口;多個(gè)進(jìn)口能夠進(jìn)行緩沖液條件的自動(dòng)化篩選。每個(gè)入口閥都整合空氣傳感器。如果檢測(cè)到氣泡,系統(tǒng)暫停,可使氣泡在進(jìn)入管路前被排除。
層析柱
柱位閥可以被連接到系統(tǒng)并被用于控制液流在層析柱上的流向。AKTA pure 可以選配兩種不同配置柱位閥中的一個(gè)。
單柱位閥V9-Cs允許連接一個(gè)層析柱,并具有集成的旁路(bypass)功能,從而無需卸下層析柱就能夠進(jìn)行系統(tǒng)清洗。
單柱位閥也可以有反向流向功能,用于強(qiáng)結(jié)合蛋白的快速有效的反向洗脫、以獲得更尖銳的條帶以及濃縮的目標(biāo)分子的洗脫。
多柱位閥V9-C或者V9H-C整合了旁路(bypass)和反向流動(dòng)功能。使用這個(gè)閥門1多可以連接5根層析柱,用于自動(dòng)層析柱的切換。多根層析柱的連接可以1大限度減少人員之間的差異,并進(jìn)一步減少氣泡進(jìn)入層析柱中的風(fēng)險(xiǎn)。多柱位閥整合兩個(gè)壓力傳感器;個(gè)傳感器檢測(cè)層析柱前壓力,能夠保護(hù)層析柱的硬件,而第二個(gè)傳感器檢測(cè)層析柱后的壓力。通過測(cè)量?jī)蓚€(gè)壓力讀數(shù)之間的差值可以計(jì)算層析填料上的壓差(Ap),保護(hù)裝填好的柱床(圖5)。
多柱位閥連接多達(dá)5根層析柱的靈活性,在用于疏水作用層析(HIC)的層析柱優(yōu)化(scouting)的研究中得到證明。
五根層析柱(HiTrapTM HIC選擇試劑盒)連接到AKTA pure系統(tǒng),用于澄清大腸桿菌破胞液中S-氨基轉(zhuǎn)移酶的純化條件優(yōu)化的層析柱優(yōu)化。紫外檢測(cè)器U9-M用于兩個(gè)波長(zhǎng)下的蛋白質(zhì)檢測(cè)。五個(gè)獨(dú)立的HIC運(yùn)行的層析圖如圖6所示。
洗脫的組分使用GF和SDS-PAGE進(jìn)行分析(數(shù)據(jù)沒有顯示)。
Aaxo信號(hào)特異地監(jiān)測(cè)目標(biāo)蛋白。在Aoo下提供1尖銳和1對(duì)稱的峰以及可能的1高純度的層析柱被選擇用于隨后的優(yōu)化和放大實(shí)驗(yàn)。HiTrap Phenyl FF(high sub)1ml和HiTrap ButylFF1ml在所使用的條件下結(jié)果1好,在這個(gè)例子中選擇HiTrap Phenyl FF(high sub)1ml用于進(jìn)一步的優(yōu)化。
pH監(jiān)測(cè)
選配的pH閥包括一個(gè)整合的pH電極,能夠在運(yùn)行期間進(jìn)行在線pH監(jiān)測(cè)。在安裝有pH電極的閥上直接注射校正液,可以輕松地進(jìn)行pH計(jì)校正。限流器連接在pH閥上,在管路中產(chǎn)生反壓,防止在紫外流動(dòng)池中形成氣泡。pH閥可以同時(shí)流經(jīng)pH電極和限流器,或者繞過其中一個(gè)或兩個(gè)。旁路中的pH電極意味著它可以隨時(shí)在線保存或者存儲(chǔ),操作方便。
出口閥
現(xiàn)有提供兩種不同的閥門可用于液體流向分步收集器、廢液或其他出口。單出口控制閥V9-Os可以連接收集器并具有一個(gè)額外出口,可用于流穿組分的收集。多出口收集閥V9-O能夠連接多個(gè)收集器,而且有10個(gè)出口可以進(jìn)行大體積組分的收集。
分步收集
AKTA pure 可以選配圓形組分收集器F9-R(圖7)或靈活的組分收集器F9-C*(圖8)。兩個(gè)收集器都通過UNICORN軟件控制,可以根據(jù)時(shí)間、體積或自動(dòng)峰識(shí)別進(jìn)行組分收集。自動(dòng)的峰識(shí)別可以1大限度減少交叉污染,把不需要的組分直接排為廢液。為了提高收集體積,兩臺(tái)組分收集器F9-R或一臺(tái)F9-R與一臺(tái)F9-C可以一起使用。
組分收集器F9-R提供具有高容量的基本選擇。可提供各種管架,適合使用1、8、15、50ml的試管。為了盡量減少液體濺出,對(duì)于達(dá)到ml/min的流速可以使用滴同步的功能。
滴同步功能可以減少按時(shí)間收集時(shí)滴與滴之間的濺出。
組分收集器F9-C具有靈活性、高容量和安全性。組分收集器配備有可以容納各種試管(1、8、15、50ml)和深孔板(4-、48-和96-孔)的不同收集盤架,這意味著可以用任何需要的規(guī)格收集樣品。可以按照用戶的需求以任何組合在收集器上裝載六個(gè)收集盤架(圖8)。除了使用6個(gè)盤架外,通過使用容納50ml試管的大試管架或容納50ml瓶子的瓶架可以使收集體積1大化。傳感器自動(dòng)掃描識(shí)別收集盤和盤架放置位置,排除樣品收集過程中的錯(cuò)誤。設(shè)計(jì)用于容納試管的收集盤架有倒置鎖死功能,當(dāng)?shù)沟魪U液時(shí)能夠鎖定試管。隨后,使用解鎖可以很容易地倒出或取出試管。
收集盤架也可用于組分的保存或作為樣品試管的支架,易于處理和清洗。收集器帶有蓋子,使樣品免受灰塵污染。
收集器的頂部可用于放置配件和設(shè)備。
組分收集器F9-C具有兩大優(yōu)點(diǎn),在組分收集期間1大限度減少交叉污染和濺出。滴同步功能可用于高達(dá)ml/min的流速,并可以盡可能的防止液滴濺出。在更高的流速下,儲(chǔ)存液功能可在需要移動(dòng)到下一管或下一孔所需要的時(shí)間內(nèi)短暫地保存液流。系統(tǒng)可以在兩個(gè)模型之間自動(dòng)變化以確保獲得1佳性能。
其他選配模塊
AKTA pure是一種*模塊化的系統(tǒng),可以進(jìn)一步升級(jí)以提高系統(tǒng)的性能和生產(chǎn)效率。由于無障礙的模塊化設(shè)計(jì),它們很容易改變,方便進(jìn)行快速和有效的定制。
多功能閥V9-V是一種常規(guī)的4位閥,可以用于針對(duì)特殊應(yīng)用定制流路例如,用于多步純化。
如果樣品通過系統(tǒng)泵上樣,則混合器旁路閥門V9-M用于混合器。
樣品環(huán)閥V9-L允許使用多達(dá)五個(gè)環(huán),而且當(dāng)進(jìn)行多步純化時(shí)用于中間組分的收集,或者用于多達(dá)五種不同樣品的自動(dòng)純化。例如,樣品環(huán)閥也可以用于放置昂貴試劑,節(jié)約試劑用量。
可1多選配兩個(gè)額外的8位進(jìn)口閥門以擴(kuò)大緩沖液和樣品進(jìn)口容量。1多選配四個(gè)額外的空氣傳感器,可以被放置在管路中以增加安全性,例如在進(jìn)口閥前或在層析柱前。
1/O-boxE9提供了一種連接外部接口設(shè)備的方法,例如檢測(cè)器。I/0-boxE9需要整合到系統(tǒng)的外部設(shè)備接收模擬或數(shù)字的信號(hào),或者傳輸模擬或數(shù)字的信號(hào)到外部設(shè)備。可以連接兩個(gè)/O-boxE9單元到AKTA pure。可以在訂購(gòu)信息中找到一列可供使用的選配的閥門和其他選項(xiàng)。
UNICORN6控制軟件
所有從實(shí)驗(yàn)室規(guī)模到生產(chǎn)規(guī)模的AKTA系統(tǒng)都使用UNICORN軟件。UNICORN含有初學(xué)者和有經(jīng)驗(yàn)的用戶進(jìn)行的所有類型層析所需要的工具,包括從建立和運(yùn)行方法到評(píng)估數(shù)據(jù)。
AKTA pure 的操作是由 UNICORN6系統(tǒng)軟件控制,它內(nèi)置了編輯方法、控制系統(tǒng)、分析層析結(jié)果的諸多信息。更方便的是,也可提供能夠遠(yuǎn)程控制AKTA pure許可。
UNICORN6的主要特點(diǎn)是:
·直觀的軟件設(shè)計(jì):使用預(yù)定義階段(一步步)來建立簡(jiǎn)單、直觀和靈活的方法·數(shù)據(jù)庫(kù)存儲(chǔ):強(qiáng)大的數(shù)據(jù)存儲(chǔ)可以快速訪問數(shù)據(jù),確保數(shù)據(jù)安全性和完整性·直觀的過程畫面:顯示當(dāng)前開放的流路,并為手動(dòng)控制運(yùn)行提供直觀的方法·層析柱日志(選配):可追蹤性和操作安全性,追蹤單個(gè)層析柱和運(yùn)行數(shù)據(jù)的寶貴工具·實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(DoE,選配):整合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)功能,可以從較少的試驗(yàn)中獲得更精確的信息,是節(jié)省成本和時(shí)間的方法開發(fā)方法編輯模塊
方法編輯含有用于控制層析運(yùn)行的所有指令。在UNICORN6中,方法編輯具有用戶友好的圖形界面,用于方法和運(yùn)行性能的簡(jiǎn)單瀏覽和編輯。圖9顯示了一個(gè)具有自定義窗口的方法編輯的截圖,提供了運(yùn)行的全面概況。
在UNICORN6中,使用階段(phase)建立方法。每個(gè)階段(phase)反映了層析運(yùn)行中的一個(gè)步驟,例如平衡、上樣或洗脫。方法編輯含有針對(duì)不同層析技術(shù)和維護(hù)程序的預(yù)定義方法,以及用于建立或編輯您自己的方法的預(yù)定義階段(phase)。
通過從階段庫(kù)(Phase Library)中拖拽階段(phase)到方法概要中就可以簡(jiǎn)單地建立和編輯方法。在階段(phase)屬性窗口中,具體的運(yùn)行參數(shù)被設(shè)定,這些設(shè)定值被自動(dòng)編程在文本說明窗口中。當(dāng)選擇了一種層析柱類型時(shí),對(duì)于這種類型層析柱的參數(shù)設(shè)定值(例如默認(rèn)流速和壓力上限)將自動(dòng)設(shè)置。
階段(phase)屬性窗口可以對(duì)方法進(jìn)行簡(jiǎn)單的編輯,而更高級(jí)的用戶可以在文本說明窗口中直接編繩方法。為了進(jìn)行快速的編輯,工具欄含有常用的命令,例如Undo、Redo和Save。
系統(tǒng)控制
系統(tǒng)控制用于開始、瀏覽和控制方法運(yùn)行。這個(gè)模塊含有三個(gè)窗口,提供了運(yùn)行狀態(tài)的概況。運(yùn)行數(shù)據(jù)窗口代表當(dāng)前以數(shù)值形式表示的數(shù)據(jù),而層析圖窗口在整個(gè)方法運(yùn)行期間把數(shù)據(jù)顯示為曲線。過程畫面窗口顯示運(yùn)行期間當(dāng)前的流路,并可以用于控制運(yùn)行(圖10)。包含在過程畫面中的顏色指示顯示當(dāng)前開放的流動(dòng)管路、關(guān)閉的管路或開放的無流動(dòng)的管路。來自監(jiān)測(cè)器的實(shí)時(shí)數(shù)據(jù)也顯示在過程畫面中。
層析柱日志
軟件的一個(gè)選配功能是層析柱日志,可提高操作的安全性。這種實(shí)用的功能可追蹤與單根層析柱有關(guān)的重要運(yùn)行數(shù)據(jù),以提供可追溯性和操作安全性。GE Healthcare的許多預(yù)裝層析柱都具有條形碼標(biāo)記,并可使用-D條碼掃描儀識(shí)別每根層析柱,或可以手動(dòng)輸入信息到UNICORN6中。也提供具有預(yù)先打印的-D矩陣編碼(條形碼)的UniTag不干膠標(biāo)簽用于標(biāo)記層析柱,以用于之前的沒有條形碼標(biāo)記柱子(例如空層析柱)。
通過跟蹤單根層析柱,對(duì)于每輪有關(guān)運(yùn)行數(shù)據(jù)的信息進(jìn)行記錄,例如總運(yùn)行數(shù)和1大壓力,可以設(shè)置通知限制,以定義在兩次清洗之間層析柱可以運(yùn)行的次數(shù),當(dāng)?shù)搅藢游鲋S護(hù)時(shí)間時(shí)會(huì)通知用戶。在層析柱日志中,點(diǎn)擊針對(duì)特定層析柱的層析柱歷史圖標(biāo),就可以得到這根層析柱的所有運(yùn)行記錄。
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(DoE)功能
可以選配實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(DoE)功能。DoE是一種用于方法優(yōu)化的強(qiáng)大工具。DoE提供一種有效和邏輯性的方法,其中所選擇的參數(shù)可以同時(shí)變化,因此可以從幾個(gè)實(shí)驗(yàn)獲得大量的數(shù)據(jù)(圖11)。因?yàn)镈oE被地整合在UNICORN6中,優(yōu)化(Scouting)由DOE方案自動(dòng)生成,可以進(jìn)行快速和有效的方法優(yōu)化。
層析系統(tǒng):配件
AKTA pure 配件包括用于連接層析柱的層析柱支架和夾具、瓶架和連接系統(tǒng)的管路(圖1)。具有0.5、0.5和0.75mm內(nèi)徑尺寸的管路試劑盒可以為了滿足各種目的進(jìn)行流程優(yōu)化,并用于GEHealthcare的任何實(shí)驗(yàn)室規(guī)模層析柱的連接。
預(yù)裝柱
GE Healthcare 提供廣泛系列的層析柱,包括所有層析技術(shù),用于從微克到幾百毫克水平的目標(biāo)蛋白的純化(圖11)。
這個(gè)系列包括HiTrap、HiPrep M、HiScreen TM和HiLoad TM層析柱,用于制備型層析空柱。TricornTM層析柱也可以用于微克水平的高分辨率半制備型純化以及用于蛋白質(zhì)特征性研究。除了預(yù)裝柱外,也提供有空的Tricorn、XK和HiScale TM層析空柱用于填充您所選擇的層析填料。
用于微克規(guī)模純化的層析柱
Tricorn GL和PE層析柱是預(yù)裝有各種層析技術(shù)填料的高分辨率層析柱(圖11)。層析柱的設(shè)計(jì)可以使液體洗脫液均勻分布在整個(gè)層析柱表面上,它能夠在微克和毫克規(guī)模進(jìn)行高分辨率純化。Tricorn GL層析柱是玻璃透明的,便于通過觀察填料床,而PE層析柱的PEEK試管和過濾器可以耐受更大的壓力。
用于毫克規(guī)模純化的層析柱
HiTrap 1和5ml層析柱預(yù)裝有廣泛系列的填料用于使用各種層析技術(shù)進(jìn)行純化(圖11)。層析柱可以被串聯(lián)以獲得更大的產(chǎn)量。利用HiPrep 0ml層析柱可以實(shí)現(xiàn)進(jìn)一步的放大。
RESOURCE TM預(yù)裝柱是為了在高流速下進(jìn)行高分辨率純化設(shè)計(jì)的。層析柱預(yù)裝SOURCETM的填料,其顆粒大小均一,在高流速下反壓很低。
HiScreen 預(yù)裝了Bioprocess 工業(yè)的層析填料,可以反復(fù)使用得到可重復(fù)的結(jié)果。HiScreen柱子10cm的柱床高度,可以簡(jiǎn)單進(jìn)行穩(wěn)定的工藝優(yōu)化。
HiLoad 柱是預(yù)裝了制備級(jí)的Superdex填料玻璃柱,是為凝膠過濾中進(jìn)行高分辨率的純化設(shè)計(jì)的。
為克級(jí)純化裝填自己的層析柱
AKTApure 上的裝柱程序非常方便的在恒壓和高流速下進(jìn)行層析柱的裝填。將A泵和B泵同步化產(chǎn)生流速,使得AKTApure 5和AKTApure 150的裝柱流速分別1高可以達(dá)到50ml/min 和100ml/min。
我們提供幾種類型的空柱。這些空柱如何使用依賴于填料類型和運(yùn)行條件(例如流速,壓力等)。HiScaleTM空柱是為了優(yōu)化工藝開發(fā)和制備級(jí)蛋白純化的標(biāo)準(zhǔn)液相色譜而開發(fā)。層析柱為了適合現(xiàn)代Bioprocess層析填料(例如MabSelect TM和CaptoTM填料)的應(yīng)用,可以耐受更高的壓力和更高的流速。XK層析柱已經(jīng)為蛋白純化客戶所認(rèn)可,且性能穩(wěn)定,其是為中低壓層析色譜而設(shè)計(jì)。