弗氏佐劑-免疫佐劑
弗氏佐劑 貨號(hào) 規(guī)格
KX0210046Q-10 10ml
KX0210046Q-500 500ml
貯存:4℃保存,避光(有效期3年)
弗氏佐劑(Freundadjuvant)是一種常用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的佐劑,它是將抗原水溶液與油劑(石蠟油或植物油)等量混合,再加乳化劑(羊毛脂或葉吐溫80)制成油包水抗原乳劑,稱(chēng)之為不弗氏佐劑。如在不佐劑中加入分枝桿菌(如死卡苗)則稱(chēng)為弗氏佐劑。
弗氏佐劑是一種油包水的乳濁液,能夠有效的誘導(dǎo)產(chǎn)生高滴度的抗體。弗氏佐劑含結(jié)核分枝桿菌的細(xì)胞壁成分,可以加強(qiáng)對(duì)抗原的抗體反應(yīng)。
一、制備方法:
弗氏佐劑是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的佐劑,分為不弗氏佐劑和弗氏佐劑。不弗氏佐劑是液體石蠟與羊毛脂混合而成,組分比為1~5:1,可根據(jù)需要而定,通常為2:1。不佐劑中加卡介苗(最終濃度為2~20mg/ml)或死的結(jié)核分枝桿菌,即為弗氏佐劑(FCA)。一般注射時(shí)用1/2體積FCA加上1/2體積的抗原進(jìn)行乳化,第二次或第三次注射時(shí)用不佐劑或不用佐劑。如不加佐劑,則抗原量增大10-20倍。
配制方法:按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內(nèi),用超聲波使之混勻, 高壓滅菌,置4℃下保存?zhèn)溆谩?br> 在免疫動(dòng)物前,先將弗氏佐劑與抗原按一定比例混合,佐劑和抗原體積比一般為1:1,制備成"油包水"乳狀液。因?yàn)楹琒DS很易促使其乳化成油包水抗原乳化復(fù)合物,注射入動(dòng)物體內(nèi)時(shí)一定要保持乳化 狀態(tài)??乖昧恳暱乖肿恿坎煌懊庖咴约懊庖邉?dòng)物不同而有一定差異,無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)和固定模式。一般是每兔(約2kg重)或每羊(約20kg重)第1次注射抗原1mg,以后逐次增加抗原量,最多每次不超過(guò)3mg。
佐劑與抗原乳化可按如下方法進(jìn)行:
(1)研磨法:先將佐劑加熱并取適量放入無(wú)菌的玻璃研缽內(nèi),待冷卻后再緩緩滴入等體積的抗原溶液,邊滴邊按同一方向研磨,滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后,繼續(xù)研磨一段時(shí)間,使之成為乳白色粘稠的油包水乳劑。本法適于制備大量的佐劑抗原,缺點(diǎn)是研缽壁上粘附大量乳劑,抗原損失較大。
(2)注射器混合法:將等量的弗氏佐劑和抗原溶液分別吸入兩個(gè)注射器內(nèi),兩注射器之間以一細(xì)膠管相連,注意排凈空氣,然后交替推動(dòng)針管,直至形成粘稠的乳劑為止。本法優(yōu)點(diǎn)是容易做到無(wú)菌操作,抗原損失少,適用于制備少量的抗原乳劑。但同時(shí)難以乳化,個(gè)別抗原,用塑料注射器根本推不動(dòng),而用玻璃注射器又有滲漏。制備好的乳化劑經(jīng)鑒定才能適用。鑒定方法是將乳化劑滴入冷水中,若保持完整不分散,成滴狀浮于水面,即乳化,為合格的油包水劑。
(3) 超聲:實(shí)驗(yàn)室條件好點(diǎn)的,比如說(shuō)有超聲破碎儀的,一定要控制超聲頻率和時(shí)間,超聲容易激發(fā)一些自由基,對(duì)抗原有未知損害。乳化方法要根據(jù)抗原和需要而定。
二、其他免疫佐劑的物質(zhì)
弗氏佐劑也屬于免疫佐劑。其他免疫佐劑的物質(zhì)有:
①微生物及其產(chǎn)物,常用的微生物有分枝桿菌、短小棒狀桿菌、百日咳桿菌以及處左蘭氏陰性桿菌的提取物脂多糖,自分枝桿菌的提取物質(zhì)胞壁酰二肽等。
②多聚核苷酸,如多聚酸:胞苷酸(poly1:C),多聚腺苷酸(poly1:A:μ)等;
③無(wú)機(jī)物,如明礬及氫化鋁等。
佐劑的作用機(jī)制尚不清楚:①它可能增加抗原的表面面積,易為巨噬細(xì)胞所吞噬;
②延長(zhǎng)抗原在體內(nèi)的存留期,增加與免疫細(xì)胞接觸的機(jī)遇;
③誘發(fā)抗原注射部位及其局部淋巴結(jié)的炎癥反應(yīng),有利于刺激免疫細(xì)胞的增殖作用。
存儲(chǔ)條件:儲(chǔ)存在低溫,通風(fēng)的區(qū)域
弗氏佐劑使用注意事項(xiàng):
一、使用說(shuō)明 本產(chǎn)品與抗原混合攪拌能很快形成油包水狀態(tài),
佐劑:抗原在1:1-1:2情況下都能形成穩(wěn) 定的乳液,1:2乳化較1:1粘稠些,鑒于注射時(shí)候的阻力冬季1:1,夏季1:2乳化。
1:2乳化 后滴水?dāng)?shù)周不散;經(jīng)多品種抗原多種屬動(dòng)物測(cè)試免疫效果好,由于乳化牢固,因此 跟其他佐劑相比比較不容易出現(xiàn)免疫耐受現(xiàn)象。
二、注意事項(xiàng)
僅用于抗體制備和動(dòng)物免疫學(xué)相關(guān)研究,不得用于人類(lèi)或當(dāng)藥品使用。
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