細胞轉(zhuǎn)染試劑-QuickShuttle-Basic

QuickShuttle 系列轉(zhuǎn)染試劑屬于陽離子型轉(zhuǎn)染試劑，具有高的效率、低毒和易于使用等特點，推薦用于常規(guī)哺乳動物細胞系的瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定細胞系構(gòu)建。

QuickShuttle 區(qū)別于常規(guī)轉(zhuǎn)染試劑的兩個最主要特點是：

（1）可在貼壁細胞傳代尚未貼壁時立即進行轉(zhuǎn)染（立傳立轉(zhuǎn)）；

（2）轉(zhuǎn)染操作可在一分鐘內(nèi)完成。因此，QuickShuttle 適合用于快速大量瞬時轉(zhuǎn)染表達目的蛋白。

QuickShuttle系列轉(zhuǎn)染試劑選擇一覽表
 


產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格	產(chǎn)品用途
QuickShuttle-Basic	KX0110041	0.8ml	適用于大多數(shù)哺乳動物貼壁細胞系，可用于原代細胞和二倍體細胞
QuickShuttle-Enhanced	KX0110042	0.8ml	適用于大多數(shù)哺乳動物細胞系，專用于難轉(zhuǎn)細胞系
QuickShuttle-Superfast	KX0110043	0.8ml	細胞消化和轉(zhuǎn)染同時進行，立傳立轉(zhuǎn)?？捎糜趹腋〖毎?/span>
QuickShuttle-293	KX0110044	0.8ml	專用于各種293細胞，立傳立轉(zhuǎn)
QuickShuttle-Hela	KX0110045	0.8ml	專用于Hela細胞，立傳立轉(zhuǎn)
QuickShuttle-BHK-21	KX0110046	0.8ml	專用于BHK-21細胞，立傳立轉(zhuǎn)

細胞轉(zhuǎn)染試劑-QuickShuttle-Basic使用說明：

 貨號：KX0110041 

含量：0.8 ml 

用途：（1）用于大多數(shù)哺乳動物貼壁細胞系的瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定細胞系構(gòu)建； 

（2）用于大多數(shù)哺乳動物原代細胞和二倍體細胞的瞬時轉(zhuǎn)染。

使用方法：

 1. 轉(zhuǎn)染前 18~24 小時接種細胞到 24 孔細胞板中，每孔 5~10×104細胞，1ml 培養(yǎng)基。

備注：如果篩 選抗藥性穩(wěn)定細胞系，可以考慮簡化的實驗步驟，即在細胞傳代后直接按下述步驟 2~5 進行轉(zhuǎn)染，無 需 18~24 小時的等候時間。

 2. 將 2μg 質(zhì)粒 DNA 和 3~5μl 轉(zhuǎn)染試劑分別稀釋到 50μl 生理鹽水中。

備注：質(zhì)粒 DNA 和轉(zhuǎn)染試劑的量需要根據(jù)不同培養(yǎng)基來優(yōu)化，但理論上不超出 1~2µg 和 3~5µl 范圍。

 3. 合并上述兩溶液并混勻。備注：無需其它轉(zhuǎn)染試劑所需的 10~30 分鐘的等候時間。

 4. 將上述復合物直接加入到細胞培養(yǎng)基中，輕搖細胞板或用加樣器吸打混勻。

備注：轉(zhuǎn)染復合物可直接 加入含血清的細胞培養(yǎng)基中進行轉(zhuǎn)染。在極少情況下會出現(xiàn)貼壁細胞脫落現(xiàn)象，可先從待轉(zhuǎn)染細胞孔 中吸取 500µl 培養(yǎng)基與轉(zhuǎn)染復合物預混后再加入細胞中。若在細胞瓶中進行轉(zhuǎn)染，直接加入到無細胞 貼壁的對面或側(cè)面并搖勻即可。 

5. 將細胞板移至 37oC/5% CO2 孵箱中進行培養(yǎng)。備注：無需在轉(zhuǎn)染后 4~6 小時補加血清或更換培養(yǎng) 基。

 6. 24~72 小時后根據(jù)實驗需要進行瞬時表達分析或穩(wěn)定細胞系加壓篩選。

QuickShuttle-Basic 轉(zhuǎn)染試劑使用注意事項：

 1. 質(zhì)粒 DNA：請用能夠去除內(nèi)毒素的方法制備高質(zhì)量的質(zhì)粒 DNA。 

2. 稀釋液：0.85%（W/V）生理鹽水，用低內(nèi)毒素純水配制，高壓消毒或除菌過濾。 

3. 培養(yǎng)基：經(jīng)過 DMEM、RPMI-1640 和 M199 等常規(guī)培養(yǎng)基測試，推薦使用含 5~10%牛血清的 DMEM，若轉(zhuǎn)染效果不理想可嘗試其它培養(yǎng)基。 

4. 以 24 孔細胞板轉(zhuǎn)染實驗為例，推薦每孔低內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNA 用量為 2µg、轉(zhuǎn)染試劑用量為 3~5µl，請在正式實驗前根據(jù)不同細胞和不同培養(yǎng)基用報告基因進行優(yōu)化。 

5. 如果實驗目的在于篩選抗藥性穩(wěn)定細胞系，可在細胞傳代后尚未貼壁時直接進行轉(zhuǎn)染，從而可節(jié)省 18~24 小時的轉(zhuǎn)染前細胞培養(yǎng)時間。