天根試劑-高保真PCR-pcr反應(yīng)預(yù)混液NG219

天根試劑-高保真PCR-pcr反應(yīng)預(yù)混液NG219 TIANSeq HiFi Amplification Mix 是一種高保真PCR擴增預(yù)混液，適用于高通量測序文庫的PCR擴增和其他PCR相關(guān)的克隆和檢測。

    擴增預(yù)混液中的Ultra HiFi DNA Polymerase是通過定向分子進化技術(shù)開發(fā)得到的新型快速高保真DNA聚合酶，增強了DNA聚合酶對模板的親和力，使得此酶在擴增速度和延伸能力上得到了提升，增加了PCR成功率和產(chǎn)物量。同時，此酶具有優(yōu)良的3'- 5'外切酶活性（Proofreading活性），保真性可達市場上主流產(chǎn)品水平，保證了基因和文庫擴增過程中的真實性。此外，本產(chǎn)品中的DNA聚合酶具有熱啟動（Hot Start）功能，可有效的控制低溫情況下的非特異擴增和酶活損耗，進而保證了PCR擴增的特異性和穩(wěn)定性。
   為一管式預(yù)混Mix形式，內(nèi)含熱啟動型的Ultra HiFi DNA Polymerase、超純dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液等PCR反應(yīng)所需組分，只需加入模板和引物即可進行PCR擴增反應(yīng)，操作簡便。除此之外，預(yù)混Mix中還整合了PCR反應(yīng)增強系統(tǒng)，不但提高了預(yù)混Mix的穩(wěn)定性，使得聚合酶對PCR反應(yīng)抑制劑的耐受能力增強，還提高了Ultra HiFi DNA Polymerase對不同GC含量模板的適應(yīng)能力，使得本產(chǎn)品具有廣泛的樣品普適性和模板投入范圍， 具有降低PCR反應(yīng)的偏好性。
   pcr反應(yīng)預(yù)混液NG219的PCR產(chǎn)物為平末端，可加A處理再與T載體連接或直接使用平末端克隆載體進行基因克隆，如TIANGEN零背景快速連接試劑盒（目錄號：VT205）。

產(chǎn)品特點

 擴增快速：延伸速度可達10-15 sec/kb；  延伸力強：可擴增長至15 kb的DNA片段；
 特異性好：具有熱啟動功能，可用于多重PCR；
 靈敏度高：模板用量可低至10 pg；
 偏好性低：針對不同GC含量的模板都有均衡的擴增效果；
 應(yīng)用廣泛：可用于高通量測序文庫的PCR擴增和其他PCR相關(guān)的克隆和檢測。

適用范圍

    用于DNA的高保真快速擴增，如基因表達克隆、基因定點突變、基因組點突變的分析 （SNP）等；更可用于高通量測序中，如高保真基因組DNA文庫的富集。 

實驗例

實驗1

使用分子信標(biāo)法（Ma et al., Anal Biochem, 2006）檢測不同高保真酶的熱啟動性。所有產(chǎn)品均宣傳其具有熱啟動能力，但檢測結(jié)果表明這些產(chǎn)品中只有 UltraHiFi在95度時才被激活，其余產(chǎn)品在40-50 度時均有鏈退火和延伸能力。

實驗2

使用 Lac I法檢測酶的保真性。TIANGEN UltraHiFi的保真性是普通 Taq酶的50倍以上

實驗3

實驗4

實驗5