熒光定量 pcr試劑-天根SYBR Green
天根目錄號：FP205
天根試劑盒-FP205特點
1. SuperReal PreMix Plus采用了的雙組分熱啟動DNA聚合酶(化學修飾的HotStar Taq
DNA聚合酶和抗體修飾的Anti Taq DNA聚合酶)，從而構成酶活自動調(diào)節(jié)系統(tǒng)，配合精心
優(yōu)化buffer體系，具有高擴增效率，高擴增特異性和寬廣的可信范圍的特點。
2. 本產(chǎn)品Buffer體系平衡了K+和NH4+ 的比例，還特別添加了的H-Bond因子, 能協(xié)同調(diào)整
反應體系中的氫鍵作用力，使引物模板退火條件更加嚴謹，反應的專一性增強，重復性
更好。
3. SuperReal PreMix Plus中預混有SYBR Green I，PCR反應液配制時，只需加入模板、引
物、滅菌蒸餾水便可進行Real Time PCR反應，操作簡單方便。
4. 本產(chǎn)品附帶ROX Reference Dye，用于消除信號本底以及校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號
誤差，方便客戶針對不同型號熒光定量PCR儀時選擇對應濃度使用。
試劑盒原理
本產(chǎn)品采用了雙組分熱啟動DNA聚合酶進行PCR擴增，通過檢測反應進程中
SYBR Green I的熒光強度，達到檢測PCR產(chǎn)物擴增量的目的。
本產(chǎn)品中雙熱啟動酶構成了的酶活自動調(diào)節(jié)系統(tǒng)。酶活自動調(diào)節(jié)系統(tǒng)是由化學修飾
的HotStar Taq DNA聚合酶和抗體修飾的Anti Taq DNA聚合酶組成。其中HotStar Taq DNA
聚合酶占絕大部分比例，其聚合酶活性的激活是嚴格依賴于95℃高溫的一個緩釋過程，而
Anti Taq DNA聚合酶則在95℃高溫下激活。經(jīng)過95℃條件下孵育15 min激活大部分
HotStarTaq DNA聚合酶，進入PCR循環(huán)后，每經(jīng)過一輪95℃條件下變性，即可重新激活一
部分HotStar Taq DNA聚合酶。HotStar Taq DNA聚合酶的酶活緩釋機制使其可以與Anti
Taq DNA聚合酶構成的酶活自動調(diào)節(jié)系統(tǒng)。PCR反應初期，激活的Anti Taq DNA聚
合酶可以協(xié)同已經(jīng)激活的HotStar Taq DNA聚合酶達到優(yōu)化酶活狀態(tài)，而在整個PCR反應過
程中，每一輪新釋放的HotStart Taq DNA聚合酶活力剛好可以彌補因熱變性所導致的部分酶
活損失。因此，SuperReal PreMix Plus在整個PCR反應過程始終保持優(yōu)化的DNA聚合酶活
力，配合精心優(yōu)化Buffer體系，從而可以獲得高擴增效率，高擴增特異性和更加廣泛性的模
板適應性。
注意事項
1． PCR反應的預變性條件必須設定為95℃ 15 min，用以充分激活熱啟動酶。
2．本產(chǎn)品中含有熒光染料SYBR Green I，保存本產(chǎn)品或配制PCR反應液時應避免強光照
射。
3．如果試劑沒有混勻，其反應性能會有所下降。使用時請上下顛倒輕輕混勻，請不要使用
振蕩器進行混勻，盡量避免出現(xiàn)泡沫，并經(jīng)瞬時離心后使用。
4．引物純度對反應特異性影響很大，建議使用PAGE級別以上純化的引物。
5．引物終濃度為0.3 μM可以在大多數(shù)體系中獲得良好的擴增結果。如果需要進一步優(yōu)化，
可以在 0.2-0.5 μM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。
6．20 μl反應體系中，基因組DNA或cDNA模板的使用量一般小于100 ng，逆轉錄產(chǎn)物作為
模板時，使用量應不超過PCR體系終體積的20%。
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