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廣州健侖生物科技有限公司


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禽流感H7N9病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

禽流感H7N9病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒

詳細(xì)介紹

 H7N9禽流感病毒檢測(cè)試劑盒, H7N9禽流感病毒診斷試劑盒, H7N9試劑盒

H7N9禽流感病毒核酸熒光PCR測(cè)定試劑盒
Avian influenza virus (H7N9) Real Time RT-PCR Kit
H7N9禽流感病毒試劑產(chǎn)品專線:189 2505 2681
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱:禽流感病毒H7N9核酸測(cè)定試劑盒
英文名稱:Avian influenza virus (H7N9) Real Time RT-PCR Kit
【包裝規(guī)格】 25T/盒
【用途】通過(guò)對(duì)樣本中禽流感病毒H7基因和N9基因的特異性RNA核酸片段分別進(jìn)行定性檢測(cè),可用于臨床對(duì)可疑感染患者的病原學(xué)鑒別診斷。
【檢驗(yàn)原理】本試劑盒采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)結(jié)合熒光探針技術(shù),對(duì)禽流感H7N9特異性核酸片段進(jìn)行熒光PCR檢測(cè)。
【試劑盒主要組成成份】

 

序號(hào)
組分
數(shù)量
體積/人份
1
H7N9核酸熒光PCR檢測(cè)混合液
480?l×1
19?l
2
RT-PCR酶
28?l×1
1?l
3
DEPC-H2O
400?l×1
4
陽(yáng)性對(duì)照品
30?l×1

 

 
說(shuō)明:不同批號(hào)的組分不可以互換使用。
自備試劑:Trizol;氯仿;75%乙醇;異丙醇或磁珠法RNA提取試劑;本公司可以代為訂購(gòu)或提供銷售商。
【儲(chǔ)存條件和有效期】 試劑盒應(yīng)在-20℃及以下溫度避光保存,有效期12個(gè)月。采用冰盒行運(yùn)輸;熒光PCR檢測(cè)混合液反復(fù)凍融不宜超過(guò)3次。
【適用儀器】 本試劑盒適用于ABI7000,ABI7300ABI7500,ABI7900MJ-chromo4,MX3000P,MX3005P,SmartCyclerⅡ,Rotor-Gene6000,Lightcycler R480,iCycleriQ4iCycleriQ5,Bio-Rad CFX96,SLAN等多色熒光PCR儀及相應(yīng)軟件。
【標(biāo)本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無(wú)菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,將分泌物或*置入無(wú)菌玻璃管(含0.4ml滅菌生理鹽水),用無(wú)菌棉球?qū)⒃嚬苋o后,密閉送檢。標(biāo)本可立即用于檢測(cè),也可保存于-20℃待測(cè)?!緳z驗(yàn)方法】
1.標(biāo)本、對(duì)照品的核酸裂解處理
用商品化(取得科研許可證)的RNA提取試劑盒處理標(biāo)本,具體操作參見(jiàn)該試劑盒說(shuō)明書(shū)。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100?l氯仿, 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次; 13000rpm離心15min, 吸取上層液體,加入等體積異丙醇,顛倒混勻室溫靜置10min, 13000rpm離心10min,輕輕倒去上清;加入700?l 75%乙醇,顛倒洗滌,13000rpm離心5min,輕輕倒去上清,倒置于吸水紙上,棄盡液體或4000rpm離心5sec,將管壁上的殘余液體甩到管底部,用微量加樣器盡量吸干液體,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA
2.試劑配制
n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測(cè)混合液與n×1?l RT-PCR(n為反應(yīng)管數(shù)),振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中,然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽(yáng)性對(duì)照品各5?l分別加入PCR管中,蓋好管蓋,立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
4. PCR擴(kuò)增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上,*循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
45×10min; 95×15min;循環(huán)一次,再按95×15sec→60×60sec,循環(huán)45;單點(diǎn)熒光檢測(cè)在60℃,反應(yīng)體系為25?l。
熒光通道檢測(cè)選擇:選用FAM通道。
備注:如使用ABI系列PCR儀,請(qǐng)務(wù)必于passive reference 和 quencher處均選擇none。
5. 閾值設(shè)定
閾值設(shè)定原則以閾值線剛好超過(guò)DEPC-H2O的zui高點(diǎn)。
6. 質(zhì)量控制:試劑盒各對(duì)照品須達(dá)到以下要求,否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。

 

Ct值
FAM通道(檢測(cè)H7)
HEX/VIC/JOE(檢測(cè)N9)
DEPC-H2O
UNDET或45
UNDET或45
陽(yáng)性對(duì)照品
≤35
≤35

 

 
7. 試驗(yàn)結(jié)果的判斷

 

通道
Ct值
結(jié)果判斷
1
FAM+HEX
UNDET或45
樣本低于檢測(cè)限,報(bào)告為陰性
2
FAM+HEX
≤43
FAM通道為H7基因陽(yáng)性;
HEX/VIC/JOE通道為N9基因陽(yáng)性
3
FAM+HEX
43~45
復(fù)檢一次,如仍為43~45,則報(bào)告為陰性

 

 
進(jìn)行定量檢測(cè)時(shí),儀器生成標(biāo)準(zhǔn)曲線后,自動(dòng)顯示待檢樣品定量值。
【參考值范圍】陰性(檢測(cè)對(duì)象H7N9為病原微生物,在健康人體中不存在)。
【對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染,試劑污染,樣品交叉污染會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果;試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果。
【檢驗(yàn)方法的局限性】當(dāng)檢測(cè)樣本中被檢核酸濃度含量低于zui低檢測(cè)限5×103copies/ml時(shí)可能會(huì)發(fā)生假陰性的結(jié)果。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】zui低檢測(cè)限:1×103copies/ml;
【注意事項(xiàng)】 開(kāi)始檢測(cè)前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本說(shuō)明書(shū)全文。
1. 整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格分在三區(qū)進(jìn)行:PCR反應(yīng)體系的配制區(qū);標(biāo)本處理、加樣區(qū);PCR擴(kuò)增、熒光檢測(cè)及結(jié)果分析區(qū)。各區(qū)使用的儀器、設(shè)備、耗材和工作服應(yīng)獨(dú)立。實(shí)驗(yàn)后即請(qǐng)清潔工作臺(tái),并進(jìn)行消毒。
2. 使用不含熒光物質(zhì)的一次性手套經(jīng)常替換) 、一次性離心管、自卸式移液器和帶濾嘴吸頭。
3. 試劑準(zhǔn)備和標(biāo)本處理應(yīng)使用超凈工作臺(tái)負(fù)壓式或防污染罩,以防止對(duì)環(huán)境污染。
4. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照品。
5. 操作人員應(yīng)經(jīng)過(guò)專業(yè)培訓(xùn),具有一定經(jīng)驗(yàn)和操作技能。
6. 操作臺(tái)、移液器、離心機(jī)、PCR擴(kuò)增儀等儀器設(shè)備應(yīng)經(jīng)常用10%次氯酸或75%酒精、紫外線燈或臭氧消毒處理。
7. 實(shí)驗(yàn)中接觸過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品的廢棄物品(如吸頭)、擴(kuò)增完畢的離心管、標(biāo)本等應(yīng)進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。
8. 試劑使用前應(yīng)在常溫下充分融化并混勻。
9. PCR反應(yīng)混合液應(yīng)避光保存。
10. 反應(yīng)管中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊。
11. 不同批號(hào)的試劑請(qǐng)勿混用,請(qǐng)?jiān)谟行趦?nèi)使用試劑盒。
 【公司名稱】 廣州健侖生物科技有限公司

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【電子郵件】 Service@jianlun.com  Jim@jianlun.com
【騰訊 】 712628581 712628582
【公司】 www.jianlun.com 
【營(yíng)銷中心】 廣州市中山大道中358號(hào)東溪大廈B座511室
【公司地址】 廣州市天河區(qū)車陂第十五工業(yè)園一幢4067室 

  H7N9型禽流感是一種新型禽 人感染H7N9禽流感疫情防控方案(*版) 衛(wèi)生部《人感染H7N9禽流感疫情防控方案(*版)》已確定了PCR核酸檢測(cè)作為H7N9禽流感確診手 段。據(jù)悉2013年4月2日,國(guó)家CDC 已經(jīng)啟 動(dòng)物流程序,將檢測(cè)H7N9禽流感病毒的核 酸檢測(cè)PCR試劑探針及引物下發(fā)至各地方 CDC和各個(gè)診斷實(shí)驗(yàn)室,以保證H7N9的準(zhǔn)確診斷。 流感,于2013年3月底在上海和安徽兩地*發(fā)現(xiàn), 4月2日江蘇又報(bào)告4例確診病例。此次人感染的H7N9禽流感病毒是*發(fā)現(xiàn)的亞型流感病毒,尚未納入我國(guó)法定報(bào)告?zhèn)魅静”O(jiān)測(cè)報(bào)告系統(tǒng),目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)針對(duì)H7N9禽流感病毒的疫苗。

    世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)規(guī)定,禽流感病毒的檢測(cè)采用雞胚病毒分離培養(yǎng)及致病力測(cè)定。中華人民共和國(guó)*和*已聯(lián)合發(fā)布8項(xiàng)有關(guān)禽流感病毒檢測(cè)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中,通用的《禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測(cè)方法》和針對(duì)H7亞型的《H7亞型禽流感病毒熒光RT-PCR檢測(cè)方法》都是基于核酸檢測(cè)的原理。熒光RT-PCR檢測(cè)禽流感病毒系列方法,是利用分子生物學(xué)手段,檢測(cè)高致病性禽流感病毒核酸,無(wú)須做雞胚病毒分離培養(yǎng),可將檢測(cè)時(shí)間從原來(lái)的21天縮短為4個(gè)小時(shí)。

    核酸檢測(cè)(nucleic acid testing,NAT)是直接檢測(cè)病原體核酸的一系列技術(shù)的總稱,可在尚未檢測(cè)到抗原或抗體前,先檢測(cè)到病毒核酸,其基本步驟包括核酸提取、擴(kuò)增和檢測(cè)。也就是常說(shuō)的基因檢測(cè),是通過(guò)血液、其他體液或細(xì)胞對(duì) DNA進(jìn)行檢測(cè)的技術(shù),可以診斷疾病,也可以用于疾病風(fēng)險(xiǎn)。由于核酸檢測(cè)是直接檢測(cè)病原體核酸,具有高敏感,高特異和短檢測(cè)窗口期等優(yōu)點(diǎn),為疫病早診斷、早治療、降低病死率以及控制疫情爭(zhēng)取時(shí)間。 核酸檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)從定性檢測(cè)發(fā)展到實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)。針對(duì)有些臨床需要,除能夠依據(jù)陰陽(yáng)性判斷確證病例以外還可以依據(jù)核酸的載量判斷感染程度。

    根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),H7N9禽流感病毒的核酸檢測(cè)采用的熒光RT-PCR檢測(cè)需要實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀用于定量檢測(cè),或PCR基因擴(kuò)增儀用于定性檢測(cè),以及依據(jù)H7N9人感染禽流感的核酸特定序列研制的基于引物和探針的PCR檢測(cè)試劑盒。
    據(jù)悉2013年4月2日,國(guó)家CDC 已經(jīng)啟動(dòng)物流程序,將檢測(cè)H7N9禽流感病毒的核酸檢測(cè)PCR試劑探針及引物下發(fā)至各地方CDC和各個(gè)診斷實(shí)驗(yàn)室,以保證H7N9的準(zhǔn)確診斷。

廣州健侖生物科技科技有限公司(www.jianlun.com)10多年來(lái)一直專注核酸檢測(cè),PCR基因擴(kuò)增儀,實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀等儀器和試劑的研制,在國(guó)家重點(diǎn)科技計(jì)劃等項(xiàng)目的支持下已有多個(gè)產(chǎn)品獲得科研注冊(cè)證,成為SARS、H1N1等疾病的法定檢測(cè)設(shè)備,這些儀器和試劑產(chǎn)品都是進(jìn)行H7N9禽流感病毒核酸檢測(cè)的*內(nèi)容。

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